上海户实医药科技有限公司
2016/6/30 17:30:05PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来定量样品中DNA含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、 成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严 格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。
技术背景:
作为 DNA 染色剂之一的 PicoGreen 荧光染料特异性地与样品中双链 DNA 结合,产生荧光信号。PicoGreen 技术可以检测到低达 0.5 纳克双链 DNA 的变化。DNA 的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧 光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation) 低,不受样品化学成分的干扰。
产品内容:
染色液(Reagent A) 微升
稀释液(Reagent B) 毫升
标准液(Reagent C) 毫升
产品说明书 1 份
保存方式:
保存 染色液(Reagent A)和 标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在 4℃冰箱里, 染色液(Reagent A)避免光照,有效保证6个月
用户自备1.5 毫升离心管:用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板:用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒实验步骤:
一、 测定准备:
1.准备好待测样品,置于冰槽里
2.设定好荧光分光光度仪(温度为 37℃):激发波长 480nm,散发波长 530nm,并置零
3.实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的 染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀释液(Reagent B)到新的 1.5 毫升离心管,加入 xx 微升 染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。
二、 构建标准曲线:
1.准备好 5 个 1.5 毫升离心管,标记为 1 至 5 号管
2.分别加入 xx 微升 稀释液(Reagent B)到每个离心管
3.移取 xx 微升 标准液(Reagent C)到 1 号管,混匀
4. 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的 标准液(Reagent C)到 2 号管,混匀
5.小心移取 xx 微升 2 号管稀释的 标准液(Reagent C)到 3 号管,混匀
6. 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的 标准液(Reagent C)到 4 号管,混匀
7.将 1 至 5 号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表:
管号 | 缓冲液(Reagent B) | 标准液(Reagent C) | 标准 DNA 总量 |
1 | xx 微升 | xx 微升 | xx 微克 |
2 | xx 微升 | xx 微升 1 号管 | xx 微克 |
3 | xx 微升 | xx 微升 2 号管 | xx 微克 |
4 | xx 微升 | xx 微升 3 号管 | xx 微克 |
5 | xx 微升 | 空对照 | 0 |
8.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀释液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿
9.加入 500 微升上述配制的标准液
10.室温下,孵育 5 分钟,避免光照
11.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12.重复实验步骤 8 至 11 四次
13.绘制标准曲线:纵座标(Y 轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X 轴)为 DNA 含量(微克)
三、 样品检测
1.移取 xx 微升含有 染色液(Reagent A)和 稀释液(Reagent B)的 染色工作液到新的比色皿
2.加入 500 微升待测样品
3.室温下,孵育 5 分钟,避免光照
4.即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5.根据标准曲线获得样品对应 DNA 含量(微克)
6.样品实际 DNA 浓度:
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒注意事项:
1.本产品为 20 次(比色皿)和 100 次(96 孔板)操作,包括标准曲线测定
2.操作时,须戴手套
3.使用新鲜配制的 染色工作液,务必不要超过 2 小时,且注意避光
4.建议使用塑料管配制 染色工作液,而不是玻璃制品
5.孵育时,避免光照
6.系统检测,标准曲线测定 1 次即可;如果仪器更换,则需要重新测定 1 次
7.如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
8.可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以 5,包括标准 DNA 含量,其计算公式[根据标准曲线获得样品对应DNA 浓度(微克)X样品稀释倍数]÷0.1(样品容量;毫升)=微克/毫升
9.盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链 DNA 和 RNA 不会干扰检测
10.本公司提供系列DNA检测试剂产品
质量标准:
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定高度敏感
使用承诺:
上海户实秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证 说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。