PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来定量样品中DNA含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、 成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严 格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。
技术背景:
作为 DNA 染色剂之一的 PicoGreen 荧光染料特异性地与样品中双链 DNA 结合，产生荧光信号。PicoGreen 技术可以检测到低达 0.5 纳克双链 DNA 的变化。DNA 的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧 光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard Deviation） 低，不受样品化学成分的干扰。
产品内容：
染色液（Reagent A） 微升
稀释液（Reagent B） 毫升
标准液（Reagent C） 毫升
产品说明书 1 份
保存方式：
保存 染色液（Reagent A）和 标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里， 染色液（Reagent A）避免光照，有效保证6个月
用户自备1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板：用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒实验步骤：
一、 测定准备：
1．准备好待测样品，置于冰槽里
2．设定好荧光分光光度仪（温度为 37℃）：激发波长 480nm，散发波长 530nm，并置零
3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀释液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
二、 构建标准曲线：
1．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
2．分别加入 xx 微升 稀释液（Reagent B）到每个离心管
3．移取 xx 微升 标准液（Reagent C）到 1 号管，混匀
4. 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 2 号管，混匀
5．小心移取 xx 微升 2 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 3 号管，混匀
6. 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 4 号管，混匀
7．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表：
管号 | 缓冲液（Reagent B） | 标准液（Reagent C） | 标准 DNA 总量 |
1 | xx 微升 | xx 微升 | xx 微克 |
2 | xx 微升 | xx 微升 1 号管 | xx 微克 |
3 | xx 微升 | xx 微升 2 号管 | xx 微克 |
4 | xx 微升 | xx 微升 3 号管 | xx 微克 |
5 | xx 微升 | 空对照 | 0 |
8．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀释液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿
9．加入 500 微升上述配制的标准液
10．室温下，孵育 5 分钟，避免光照
11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
12.重复实验步骤 8 至 11 四次
13.绘制标准曲线：纵座标（Y 轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X 轴）为 DNA 含量（微克）
三、 样品检测
1．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀释液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿
2．加入 500 微升待测样品
3．室温下，孵育 5 分钟，避免光照
4.即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
5．根据标准曲线获得样品对应 DNA 含量（微克）
6．样品实际 DNA 浓度：
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒注意事项：
1．本产品为 20 次（比色皿）和 100 次（96 孔板）操作，包括标准曲线测定
2．操作时，须戴手套
3．使用新鲜配制的 染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
4．建议使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品
5．孵育时，避免光照
6．系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果仪器更换，则需要重新测定 1 次
7．如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量
8．可以使用荧光酶标仪检测，试剂用量和体系均除以 5，包括标准 DNA 含量，其计算公式[根据标准曲线获得样品对应DNA 浓度（微克）X样品稀释倍数]÷0.1（样品容量；毫升）＝微克/毫升
9．盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链 DNA 和 RNA 不会干扰检测
10.本公司提供系列DNA检测试剂产品
质量标准：
1．本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定高度敏感
使用承诺:
上海沪峥秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
