动物外周血白细胞分离液实验方法

“XXXX”动物外周血白细胞分离液实验方法

（细胞培养及分子生物学）

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

无菌胶头滴管或塑料滴管

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

首先取抗凝血，根据样本量大小，分以下两种情况：

情况 A：血液样本量小于 5ml 时，实验方法如下：

1.取一支 15ml 离心管，先加入 5ml 分离液

2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果。）

3.离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入 10 ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心 10min。重复洗涤 2-3 次，即得所需白细胞。

4.如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。

情况 B：血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：

1.取一支适当的离心管，先加入与样本等量的分离液。

2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（zui大离心力可至 1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

3.剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 与步骤 4。

【注意事项】

1.全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*的实验结果，在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2.本实验不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

3.分离液用量大于稀释后血液样本时，分离效果更佳。

4.当血液样本粘度过高需稀释时，*稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。

5.如实验后细胞得率或活性过低，请天津灏洋以寻求帮助，具体详见下方生产企业信息。

【储存条件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

【相关实验技术方案】

1.所获得白细胞的培养技术。

2.所获得白细胞的核酸提取技术。

3.所获得白细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR 技术

【可能存在的问题及解决方法】

1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

3.本分离液依照标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不*的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到*分离效果，

离心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。