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Anti-BRCA1/BAP1抗体,乳腺癌易感基因1抗体

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详细信息

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【产品编号】:BYK-0803R

【产品规格】:0.1ml/0.2ml

【产品价格】:询价(电询 客服:)

【抗体来源】:Rabbit OR Mouse

【产品用途】:科研实验,用于免疫组化实验,WB实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。
【性 状】: Lyophilized or Liquid
【浓 度】: 1mg/1ml
【亚 型】: IgG

【贮 存】: 贮存于-20℃.

Anti-BRCA1/BAP1抗体,乳腺癌易感基因1抗体应用于WB实验蛋白提样品制备步骤:
1、 将培养液吸入至15 ml离心管中,于2500 rpm离心5 min。
2、 弃上清,加入5 ml PBS并用枪轻轻吹打洗涤,然后2500 rpm离心5 min。弃上清后用PBS重复洗涤一次。
3、 用枪吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。
4、将裂解液4℃、12000 rpm离心5 min,取上清分装于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法测蛋白浓度
SDS-PAGE电泳
1、 玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。
2、按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用10 ml枪吸取5 ml胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。(灌胶时开始可快一些,胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下,这样胶中才不会有气泡。加水液封时要慢,否则胶会被冲变型。)
3、 当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。再等3 min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4、 按方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶后将梳子插入孔槽。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。待到浓缩胶凝固后,两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5、 用水冲洗浓缩胶,将其放入电泳槽中。
6、 测完蛋白含量后,计算含20-50 μg蛋白(根据自己的实验需要进行选择,没有固定的量)的溶液体积即为上样量。取出上样样品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。上样前要将样品于沸水中煮5-10 min使蛋白变性。
7、 加入足够的电泳缓冲液后开始准备上样。(电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。)用微量进样器贴壁吸取样品,将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品(包括一孔做可视的蛋白marker)。(加样太快可使样品冲出加样孔,若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时,进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤数次,以免交叉污染)
8、电泳:浓缩胶时用80-100 V跑,到分离胶以后用150-200 V跑,总时间2 h左右,电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳,进行转膜。

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