普鲁士蓝染色试剂盒（Perls stain）

普鲁士蓝染色试剂盒说明：

含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其

含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血

红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。

Perls 普鲁士蓝反应（Prussian blue reaction）又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁氰化

钾和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。Perls 普

鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其

染色原理为：亚铁qing hua jia溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰

化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝，所以该反应被称

为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进

行复染，如核固红、伊红、中性红等。

Perls stain 常用于显示局部组织内各种出血性病变，常见于吞噬细胞内。在判断含铁血

黄素沉积时，用Perls 反应可以得到证实，该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色

素。该染色液稳定性好、可以*保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。

普鲁士蓝染色试剂盒（Perls stain，伊红法），其复染液采用伊红染色液，也是常用的复

染液，该复染液染色时间较核固红染色液要短。

普鲁士蓝染色试剂盒组成：

Perls stain A

Perls stain B

临用前，取A1、A2 等量混合，即为试剂(A)Perls stain，不宜提前配制。、

试剂(B): 伊红染色

液 50ml

使用说明书

主要成分：

试剂(A): 主要由亚铁qing hua jia、稀酸等组成。

试剂(B): 主要由伊红、防腐剂等组成。

自备材料：

1、10%的中性福尔马林

2、系列乙醇

3、蒸馏水

4、4%的多聚甲醛

普鲁士蓝染色试剂盒操作步骤（仅供参考）：

（一）石蜡切片染色

1、 切片脱蜡至水

① 二甲苯(Ⅰ) 5～10min

② 二甲苯(Ⅱ) 5～10min

③无水乙醇(Ⅰ)（可选） 3～5min

④无水乙醇(Ⅱ)（可选） 3～5min

⑤95%的乙醇 3～5min

⑥90%的乙醇 3～5min

⑦80%的乙醇 3～5min

⑧自来水或蒸馏水冲洗(Ⅰ) 1～3min

⑨自来水或蒸馏水冲洗(Ⅱ) 1～3min

2、染色

①切片入Perls stain（见注意事项6） 15～30min

②蒸馏水充分冲洗 5～10min

③伊红染色液淡染细胞核 15～30s

④自来水冲洗 1～5s

3、脱水、透明、封固

①90%乙醇 10～20s

②95%乙醇(Ⅰ) 1～2min

③95%乙醇(Ⅱ) 1～2min

④ 无水乙醇(Ⅰ) 2～3min

⑤无水乙醇(Ⅱ) 2～3min

⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2～3min

⑦二甲苯(Ⅱ) 2～3min

⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2～3min

⑨中性树脂封片。

（二）冰冻切片染色

1、 无需脱蜡，直接迅速用蒸馏水冲洗2～3min。

2、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

（三）细胞染色

1、4%多聚甲醛固定10～20min。

2、自来水冲洗2 次，每次2min。

3、蒸馏水冲洗2 次，每次2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染.结果：

含铁血黄素或三价铁 蓝色

细胞核、其他组织 红色

阴性对照（可选）

取相同连续切片脱蜡至水。置于5%的草酸中，孵育2-6h 后，经Perla stain，需要步骤

同上。结果为阴性。

普鲁士蓝染色试剂盒注意事项：

1、 切片脱蜡应尽量干净。

2、 组织固定常采用10%的中性福尔马林，经普通福尔马林*固定后，组织会有损伤。

3、 临用前取A1、A2 液等量混合，即为试剂（A），现配现用，不可提前配制。

4、整个操作过程中容器要干净，避免使用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因

普通水内含铁质。

5、避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。

6、Perls stain 染色时，应根据样品情况调整着色时间。

7、 所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要.尸检肺组织是一

个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞).

8、95%乙醇、90%乙醇应经常更换新液.

9、 冰冻切片和细胞的染色,应根据具体情况摸索实验条件.

10、 为了您的健康和安全,请穿实验服并戴一次性手套操作.

普鲁士蓝染色试剂盒有效期：12个月

科研领域普鲁士蓝染色试剂盒（Perls stain）

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