北京索莱宝科技有限公司
2015/11/19 15:55:06转印膜:用于蛋白质和核酸的转移和检验过程的微孔膜。
Southern blot:又称Southern印迹杂交,是研究DNA图谱的基本技术。
Northern blot:又称Northern印迹杂交,是检测RNA的基本技术。
Western blot:又称Western印迹杂交,是蛋白质检测分析的基本技术。
转印膜在蛋白质和核酸的转移和检测过程中应用广泛,不同的转印膜规格和参数不同,选择正确、均一稳定的转印膜对达到好的实验结果起到关键性的作用。
常用的三种转印膜:硝酸纤维素膜(NC膜)、带正电的尼龙膜(N66膜)、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)
转印
结合能力:带正电的尼龙膜>PVDF膜>硝酸纤维素膜。
尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。
结合稳定性
更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择;而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的,特别是需要做N端蛋白测序,在相当“严酷”的清洗条件下,当尼龙膜或者硝酸纤维素膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择,但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡,才能用。
温度耐受性:
尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹。
机械强度:
硝酸纤维素膜较脆,易破碎,不能重复使用;尼龙膜和PVDF膜机械强度较高,可重复使用。
价格比较:PVDF膜>硝酸纤维素膜>尼龙膜
可重复性:
尼龙膜可反复用于分子杂交,杂交后,探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。
操作简便性
NC膜的使用很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;比如NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途。
背景:NC膜和PVDF背景较低;尼龙膜背景高。
注:
1、Biodyne B膜:通过高密度的季铵组来增加孔的表面。我们所生产的尼龙膜具有高的灵敏度,适用于各种核酸应用。
BiodyneC膜:可以通过孔表面的羧基组耦合反应来导出。
2、醋酸纤维素膜
由于醋酸纤维素薄膜对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎*不吸附,因此无拖尾现象;电泳后区带界限清晰;通电时间较短(二十分钟至一小时);对染料也没有吸附,因此不结合的染料能*洗掉,无样品处几乎*无色。由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低有电流避免蒸发。同时其对蛋白的结合能力较其它转移膜弱些。