使用对象

IAC-SEP^®*总量免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的*B1。*免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、坚果、花生、酱油、醋、辣椒、胡椒、药材和酒类等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中中的*B1起到十分重要的作用。

IAC-SEP^®*B1免疫亲和柱适用于以下标准：

GB/T 18979-2003 食品中*的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法

SN/T 1101-2002 进出口油籽及粮谷中*的检测方法

原理

样品经甲醇+水提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有*B1特殊抗体的免疫亲和柱。此时，*被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将*B1从亲和柱上洗脱下来。zui后，用HPLC或荧光计进行定量检测。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

实验溶液制备

提取液，甲醇/水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水，混合均匀。

        甲醇/水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水，混合均匀。

HPLC流动相，甲醇/水（45+55）：取450mL甲醇加550mL水，混合均匀，用0.22微米的尼龙筛过滤。

标准溶液的配制：取*B1储备液，流动相为稀释液，配制标准品溶液。            

   注：配制好的标准品溶液2-8℃冷藏保存有效期为24h。

pH 7.0 PBS溶液：称取8.0g氯化钠，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，zui后用纯水稀释至1000mL。

0.1%的吐温/PBS：将1.0mL吐温-20加入到1L pH 7.0 PBS溶液中，混匀。

液相色谱条件

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um）

流动相：甲醇-水（45+55，v/v）

流速：0.8mL/min

检测器：荧光检测器，激发波长360nm,发射波长440nm

进样体积：20~100uL

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）