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1ml（100ul×10支） BL21（DE3）感受态细胞
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- 1ml（100ul×10支）
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武汉华联科生物技术有限公司总部位于生物产业园----武汉光谷生物医药园。公司成立于2014年4月，建有4000多平方米的办公楼，1700多平方米的实验检测平台、药物安全性评价及药物筛选等平台，配置1000多万的实验仪器设备。已建成800多平方米的SPF级动物房和普通级动物房，建有实验动物研发平台。
公司开展的服务项目有动物饲养、笼位出租、动物模型研发、疾病模型定制、基因编辑、净化、扩繁、保种、中药安全性评价、药理药效评价、抗体筛选发现、综合检测等项目。
公司与华中科技大学避孕节育新技术国家地方联合工程实验室共建理事单位，与华中农业大学和湖北大学建立了研究生工作站，与华中农业大学、湖北大学、武汉科技大学、中南民族大学、湖北中医药大学、武汉纺织大学、武汉生物工程学院等高校建立了产学研合作。我们秉承高品质、高效率、高标准的经营宗旨，持续推进科研成果转化，助力产业化发展。
详细信息
BL21（DE3）感受态细胞说明书
（Rev.A）
货号 | 规格 | 储藏 |
PD6229-10×100μl | 10×100μl | -80℃保存 |
PD6229-20×100μl | 20×100μl | -80℃保存 |
保 存：-80℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-80℃保存至少 6 个月。
产品简介：
本公司生产的BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率zui高可达 2×107cfu/μg，-80℃保存 6 个月转化效率不发生改变。
基因型: F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）
特 点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝白斑筛选。
操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
- 将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100 μl 感受态细胞为例。
- 向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。
- 将离心管置于 42℃水浴中热击60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。
- 向离心管中加入 900μl 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180 rpm 振荡培养 30分钟到1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
- 取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16小时或6-8小时培养。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取200μl 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA 总量较少，可4℃，2500g离心5min后，弃去上清约700μl，用剩余约200-300μl 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。
注意事项：
- 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
- 实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
- 转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
- 转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
- 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到zui低。
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