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BC2200-50T/48S 丙酮酸(PA)含量检测试剂盒 糖酵解
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- BC2200-50T/48S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
丙酮酸（PA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2200
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 标准品：20μmol/mL丙酮酸钠标准溶液。
2、 0.125μmol/mL标准溶液的配制：取50μL 20μmol/mL 标准液和450μL蒸馏水混匀，即2μmol/mL 标准液；再取50μL 2μmol/mL 标准液和750μL蒸馏水混匀即配成0.125μmol/mL标准溶液。
技术指标：
低检出限：0.001 μmol/mL
线性范围：0.0015-0.25 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎（冰浴，200W，超声3s，间隔10s，重复30次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）样本等液体：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取0.1mL液体样本加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：（在1.5mL EP管中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 300 | - | - |
标准溶液 | - | 300 | - |
蒸馏水 | - | - | 300 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
充分混匀后常温静置2min | |||
试剂二 | 500 | 500 | 500 |
充分混匀后于520nm波长处测定吸光值，记为A测定管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次。 | |||
三、丙酮酸含量计算
1、按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μmol/mL）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准×（V提取+V液体）÷V液体 = 0.1375×ΔA测定÷ΔA标准
2、按照样本蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μmol /mg prot）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准×V样本÷(V样本×Cpr) =0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
3、按照样本质量计算
丙酮酸含量（μmol /g 质量）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准×V提取÷W=0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷W
4、按照细菌或细胞数量计算
丙酮酸含量（μmol /104 cell）= ΔA测定÷ΔA标准×C标准×V提取÷N=0.125×ΔA测定÷ΔA标准÷N
C标准：0.125μmol/mL 标准溶液；V样本：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V提取：加入提取液体积，1mL；V液体：加入血清（浆）等液体体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细菌或细胞总数，以万计。
注意事项：
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 提取液中含有蛋白变性成分，若使用蛋白浓度计算需要另取样本提取测定。
实验实例：
1. 称取约0.1171g兔肝，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。之后按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.570-0.101=0.469，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，计算丙酮酸含量得：PA（μmol/g 质量）=0.125 ×ΔA测定÷ΔA标准÷W =1.138μmol/g 质量
2. 称取约0.1094g合欢，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清用蒸馏水稀释2倍后待测。之后按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.886- 0.101=0.785，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，计算丙酮酸含量得：PA（μmol/g 质量）=0.125 ×ΔA测定÷ΔA标准÷W ×稀释倍数=4.077μmol/g 质量
3. 取50μL兔血清之后按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA=A测定管-A空白管=0.146-0.101=0.045，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.541-0.101 =0.440，计算丙酮酸含量得：PA（μmol/mL）=0.1375 ×ΔA测定÷ΔA标准 =0.014μmol/mL
相关发表文献：
[1] Yao R, Yang Y, Lian S, et al. Effects of acute cold stress on liver O-GlcNAcylation and glycometabolism in mice[J]. International journal of molecular sciences, 2018, 19(9): 2815.
[2] Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)
[3] Xiaofen Fu,Pengsong Li,Lei Zhang,et al. Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data. Applied Microbiology and Biotechnology. March 2019;103(6):2715-2729. (IF3.67)
[4] Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018
参考文献：
[1] Venkatesh C, Ramalingam K. Lactic acid, pyruvic acid and lactate/pyruvate ratio in the Anoplocephalid tapeworm Stilesia globipunctata infecting sheep (Ovis aries)[J]. Veterinary parasitology, 2007, 144(1-2): 176-179.
[1] Randle W M, Bussard M L, Warnock D F. Ontogeny and Sulfur Fertility Affect Leaf Sulfur in Short-day Onions [J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1993, 118(6): 762-765.
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