20201ES76 BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）
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企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
详细信息
BCA Protein Quantification Kit
BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） | 20201ES76 | 500T | 278.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） | 20201ES86 | 2500T | 778.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型） | 20201ES90 | 5000T | 1518.00 |
产品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μL）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μL）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做50次，250次，500次。酶标法分别可做500次，2500次，以及5000次。
产品特点
1）灵敏度高，小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/mL。
2）速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3）线性范围广，20-2000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
4）不受大部分样品中的化学物质的影响，详情见附表1。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | ||
20201ES76（500T） | 20201ES86（2500T） | 20201ES90（5000T） | |||
20201-A | BCA试剂A | 100mL | 500mL | 2×500mL | 4℃ |
20201-B | BCA试剂B | 3mL | 15mL | 2×15mL | 4℃ |
20201-C | 蛋白标准品（BSA） | 5×1mL（2mg/mL） | 10×1mL（2mg/mL） | 10×2mL（2mg/mL） | 4℃ |
运输与保存方法
冰袋运输。试剂盒中的A、B液室温或4℃保存；蛋白标准品（BSA）长时间不用，可置于-20℃保存，有效期12个月。
注意事项
1）使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
2）低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
3）实验操作规范，提高上样量的精确度。
4）每次测定都需做相应的标准曲线，因为显色反应与温度和时间的变化有关，精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。BSA标准品体系配制可参考表1和表2。
表1 BSA标准品体系配制（比色皿检测，线性范围20-2000μg/mL）*
Vial | 稀释液体积（μL） | 2mg/mL BSA体积（μL） | BSA终浓度（μg/mL） |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
*如用比色皿检测，每管需加100μL标准品，按3个重复计算，每个浓度至少需配制300μL。
表2 BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围20-2000μg/mL）*
Vial | 稀释液体积（μL） | 2mg/mL BSA体积（μL） | BSA终浓度（μg/mL） |
A | 0 | 30 | 2000 |
B | 9 | 21 | 1400 |
C | 12 | 18 | 1200 |
D | 15 | 15 | 1000 |
E | 21 | 9 | 600 |
F | 24 | 6 | 400 |
G | 27 | 3 | 200 |
H | 49 | 1 | 40 |
I | 30 | 0 | 0=Blank |
2. 配制BCA工作液
1）计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
【注】：比色皿检测时每个样品加2.0mL BCA工作液，微孔板检测每个样品加200μL BCA工作液。
2）配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。
【注】：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。
二、检测方法
1. 比色皿检测方法（样品：BCA工作液=1:20）
1）各取100μL标准品和待测样品加入到反应管中。
2）每管加入2.0mL BCA工作液，混匀。37℃孵育30min。
【注】：也可室温孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低，可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3）冷却到室温。分光光度计检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。在10分钟内对所有样品读数。
【注】：由于BCA反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试，不会导致明显错误。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法（样品：BCA工作液=1:8）
1）各取25μL标准品和待测样品加入到微孔板中。
【注】：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用10μL标准品和待检测样品进行检测（即1:20），这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/mL。
2）每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3）冷却到室温，在酶标仪上的540-595nm波长范围处检测吸光度，其中562nm波长为*。
【注】：a）由于酶标板的光径比比色皿短，使得酶标板检测需要更好的样品：BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长，建议延长孵育时间到2h。b）延长孵育时间或者提高样品：BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度ug/mL；Y-终的OD562nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
附表：BCA蛋白浓度测定的兼容性
名称 | 耐受浓度 |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium phosphate | 25mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol （pure） | 10% |
Glycine-HCl, pH2.8 | 100mM |
HEPES | 100mM |
Hydrochloric acid | 100mM |
Leupeptin | 10mg/L |
Nickel chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
Nonidet P-40 （NP-40） | 5%（w/v） |
Octyl β -glucoside | 5%（w/v） |
Potassium thiocyanate | 3.0M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH4.8 | 200mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH7.8 | 25mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5mM |
Aprotinin | 10mg/L |
Bicine, pH8.4 | 20Mm |
Bis-Tris, pH6.5 | 33mM |
Borate, pH8.5 | 50mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent （Cat. No. 70584） | nointerference（undiluted） |
Calcium chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
CelLytic B Reagent | nointerference（undiluted） |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride （in TBS, pH8.0） | 0.8mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent （Cat. No. 71009） | nointerference（undiluted） |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol （DTE） | 1mM |
Dithiothreitol （DTT） | 1mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10mM |
EPPS, pH8.0 | 100mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
Glucose | 10mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4M |
Imidazole, pH7.0 | 50mM |
MES, PH6.1 | 100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine（10mM）in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β-thioglucpyranoside | 5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1mM |
PopCulture Reagent （Cat. No. 71092） | nointerference（undiluted） |
Reportasol Extraction Buffer （Cat. No. 70909） | nointerference（undiluted） |
Sodium chloride | 1M |
Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4 | 200mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS （150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0） | nointerference（undiluted） |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH8.0 | 25mM |
Triethanolamine, pH7.8 | 25mM |
Tris | 250mM |
Tris（hydroxypropyl）phosphine （THP） | 1mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
HB200224
