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BC3295 结合态淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
结合态淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC3295
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入5mL试剂一充分混匀备用；
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分混匀备用；
试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，充分溶解备用；
试剂七：液体250μL×2支，-20℃保存；
试剂八：液体12.5μL×2支；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。
反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入14mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。
产品说明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。
需自备的的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液制备
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混匀，置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 |
样本 | 100 |
反应液Ⅰ | 135 |
混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却 | |
试剂八 | 75 |
混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g 常温离心10min，取上清液（如果一次性测定样本较多，可以将试剂四、五和六按比例配成混合液） | |
上清液 | 150 |
试剂五 | 100 |
试剂六 | 5 |
试剂七 | 5 |
混匀后立即转移200μL微量石英比色皿或96孔板中， 340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
三、GBSS活性计算
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（U/mg prot）= [ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测×109]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。
V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GBSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。
V测：测量体积，0.26m L；V样：加入样本体积，0.1m L；V反总：反应体积，0.31mL；V上清：加入上清液体积，0.15mL；V提取：加入提取液体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。
结合态淀粉合成酶活性检测试剂盒 微量法订购说明：
1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
运输说明：
极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。
