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BC0715-100T/96S α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
- 型号
- BC0715-100T/96S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0715
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 试剂一 | 液体110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 液体0.6 mL×2支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 液体28 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体0.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 试剂五 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
| 试剂六 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
| 试剂七 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
| 试剂八 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存；
试剂五：临用前取1支试剂五，加入1 mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；
试剂六：临用前取1支试剂六，加入1.5 mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
试剂七：临用前取1支试剂七，加入1 mL试剂三，充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融（1支粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1支粉剂）；
试剂八：临用前取1支试剂八，加入0.4mL蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
工作液的配制：临用前依次取8.05 mL试剂三、0.2 mL试剂四、1 mL试剂五、1.25 mL试剂六、0.5 mL试剂七（共11mL，约55T），充分混合待用，现用现配。
产品说明：
α-KGDH（EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅*A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和辅*A生成琥珀酰辅*A、二氧化碳和NADH，NADH在340nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性和失活。
比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
测定管的ΔA值在0.01-0.25之间，若测定管的ΔA值大于0.25，需将样本进行稀释。
由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例：
取0.1g稗草进行样本处理，将取上清稀释2倍后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128，ΔA空白=A2-A1=0，按样本质量计算酶活得：
α-KGDH活性（U/g 质量）=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W×2（稀释倍数）=381.056 U/g 质量。
取0.1g小鼠肝脏进行样本处理，4 ℃ 11000g离心10min，取上清后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500，ΔA空白=A2-A1=0，按样本质量计算酶活得：
α-KGDH活性（U/g 质量）=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W=3721.25 U/g 质量。
相关发表文献：
Jianyun Yue,Changjian Du,Jing Ji,et al. Inhibition of α-ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in poplar via changes in GABA shunt. Planta. July 2018;(IF3.06)
Xiao Li,Qi Zhao,Jianni Qi,et al. lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma. International Journal of Oncology. May 2018; (IF3.571)
参考文献：
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Quantitative α-ketoglutarate dehydrogenase activity staining in brain sections and in cultured cells[J]. Analytical biochemistry, 2000, 277(1): 86-93.
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