NIH/3T3 小鼠胚胎细胞/镜像绮点（iCell）介绍

与原始的随机交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一样，NIH/3T3，是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的NIH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。这株细胞对DNA转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

NIH/3T3 小鼠胚胎细胞/镜像绮点（iCell）特性

1） 来源：胚胎
2） 形态：成纤维细胞，贴壁生长
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接受后的处理：

1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的*培养基。

4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备；DMEM+10%小牛血清+1%P/S+1%neaa+1%丙酮酸钠+1%谷氨酰胺
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：di一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类；

1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

镜像绮点（上海）细胞技术有限公司主要产品和服务介绍：

        一、原代细胞服务：
               各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源
               多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源
               原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等
               原代细胞相关技术服务及整体实验外包服务

        二、细胞系服务：
               细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书
               细胞系培养过程的技术指导
               细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等

        三、iPS细胞服务：
               iPS细胞基础培养（有滋养层or无滋养层）
               iPS细胞增殖及冷冻保存
               iPS基础培养技术实习
               新药及实验仪器上市前评估

        四、其他技术外包服务、客户定制服务等

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