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人游离胆固醇（FC）ELISA 技术试剂盒
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关于我们：
上海极威生物科技有限公司成立于上海，经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，*专注于生物领域，旗下产品种类众多，特别是ELISA试剂盒这一产品已使极威生物成为业内公司。上海极威秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，致力于发展中国的科研事业。为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。
主营业务：
公司目前主营的产品有ELISA试剂盒、生化试剂、标准品、对照品、抗体、细胞株、培养基、血清、酶、金标试剂盒、实验耗材、进口试剂及实验外包服务等。
应用领域：
公司产品在很多领域得到了广泛的应用，涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等各个领域。为各大高校、医院单位及各研究机构提供优质的产品。并*与各高校、研究机构、企业等建立了深厚的合作关系。
核心价值：
极力追求，科学！是上海极威永恒不变的宗旨；质量*，诚信为本！更是公司生存发展的基本原则。公司的核心价值是:以优质的产品、实惠的价格、完善的服务,为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品；为树立行业的地位而不懈努力，为科研事业及社会创造更多价值！
详细信息
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人游离胆固醇（FC）ELISA 技术试剂盒
使用说明书
技术原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人游离胆固醇（FC）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的技术抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人游离胆固醇（FC）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时技术，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
人游离胆固醇（FC）ELISA 技术试剂盒
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 60 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡 60 分钟。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取 10μL 加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 96 孔配置 48 孔配置 备注
微孔酶标板 12 孔×8 条 12 孔×4 条 无
标准品 0.3mL 0.3mL 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
技术抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
注：标准品浓度依次为：2000、1000、500、250、125、0 μmol/L.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡 60min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的技术抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。
结果判断
绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：最di技术浓度小于 10 μmol/L。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于 10%、板间变异系数小于 15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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