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白介素-8 ELISA KIT

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供货周期:一个月 应用领域:化工,生物产业
上海乾思生物科技有限公司

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白介素-8 ELISA KIT

上海乾思生物白介素-8 ELISA KIT品牌代理经营进口胎牛血清、细胞因子、ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA实验等。完善的库存及供应体系以及高效稳定的纯化技术,保证产品均能现货供应和产品质量的稳定性。

怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件?
ATCC(American Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。
如何选用特殊细胞系培养基?
培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之,*MEM、DMEM做贴壁细胞培养;RPMI1640做悬浮细胞培养;各种目的无血清培养*AIMV培养基(SFM)。

测序实验流程:
1 收集样品
2 相关试剂 总RNA提取试剂TREzol Reagent (RNA提取试剂), M-MLV(cDNA逆转录酶), RNA 纯化试剂, RealqPCR MasterMix (荧光定量PCR预混试剂)。
3 实验仪器 荧光定量PCR仪; PCR仪;低温离心机。
4 总RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的离心管中加入1µl模板总RNA(1µg/µl); 2µl随机引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl体系。混匀后70℃变性RNA 5分钟,冰上速冷1分钟,离心将溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl体系。PCR仪中反应条件设置 37℃延伸60min,70℃保温15min终止反应。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存备用。
6 引物设计与thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 实时定量PCR 按以下反应体系进行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul,下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR仪扩增反应条件设置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40个循环)。
8 PCR产物溶解曲线分析 将所扩增的PCR 产物进行溶解曲线分析,单峰溶解曲线表示扩增产物单一,无非特异性扩增产物。溶解曲线生成的反应程序为: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

注意事项:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定,对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融,标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月,-70度可保存6个月,部分标本需添加抑tai酶。

细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
  (1)细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、破损、漏液等,重发;
  (2)冻存的细胞复苏后,绝大多数细胞未存活,重发;
  (3)存活的细胞静置24小时后,绝大多数细胞未存活,重发;
  (4)冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封,出现污染,重发;
  (5)视具体情况而定。
细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
  (1)客户造成细胞污染,不重发;
  (2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
  (3)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
  (4)细胞培养时经其它处理的,不重发;
  (5)细胞收到2天内,未告知,不重发;
  (6)视具体情况而定。


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