白介素 8（IL-8），又称趋化因子 CXCL8，是一种由单核 - 巨噬细胞、上皮细胞等分泌的细胞因子，分子量约 8kd。多种细胞在 LPS、TNF 或 IL-1 刺激下均可产生 IL-8 。IL-8 通过结合趋化因子受体白细胞介素 - 8 受体 α（IL8-Rα，CXCR1）和白细胞介素 - 8 受体 β（IL-8Rβ，CXCR2），对中性粒细胞发挥趋化和激活作用，参与中性粒细胞介导的组织损伤，调节炎症反应 。在自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病等病症中，IL-8 产生异常，因此定量检测 IL-8 对于研究疾病发生发展及指导治疗意义重大 。而白介素 8 受体（可溶性）ELISA KIT 正是用于精准检测相关样本中可溶性白介素 8 受体含量的工具 。
该试剂盒主要采用双抗体夹心两步法酶联免疫吸附试验（ELISA） 。在预包被抗人白介素 - 8 受体（可溶性）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入含可溶性白介素 8 受体的校准品和待测样本，37°C 孵育后，样本中的可溶性白介素 8 受体与固相抗体特异性结合 。接着加入生wu素标记抗体，再次孵育，使其与已结合在固相抗体上的可溶性白介素 8 受体结合 。经过充分温育与洗涤，去除未结合物质后，加入 HRP 偶联的亲和素，其与生wu素标记抗体特异性结合 。至此，在微孔板固相表面形成 “固相抗体 - 抗原 - 生wu素标记抗体 - 亲和素酶” 的夹心复合物 。之后加入底物 TMB，在 HRP 酶的催化下，TMB 转化为蓝色，再加入终止液（如硫酸），反应液迅速变为黄色 。通过酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度（OD 值），吸光度与待测样品中可溶性白介素 8 受体的浓度呈正相关 。通过拟合校准品曲线，就能准确计算出样本中可溶性白介素 8 受体的浓度 。
酶联板：已预包被抗人白介素 8 受体（可溶性）抗体，一般为 96 孔或 48 孔，用于承载样本和试剂反应 。
标准品：通常为冻干品，有 2 瓶 。临用前需用样品稀释液溶解并稀释至特定浓度（如高浓度标准品可能为 1600pg/mL），再进行系列倍比稀释，得到不同浓度梯度的标准品溶液，如 800pg/mL、400pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL 等，用于绘制标准曲线 。
样品稀释液：用于稀释标准品以及稀释浓度过高的待测样本，一般为 1×20mL 装 。
生wu素标记抗体：与可溶性白介素 8 受体特异性结合，为浓缩液，使用时需用生wu素标记抗体稀释液按比例稀释，一般为 1×120μL / 瓶（1：100） 。
生wu素标记抗体稀释液：1×10mL 装，用于稀释生wu素标记抗体 。
HRP 偶联的亲和素：与生wu素标记抗体结合，形成完整的检测体系，为浓缩液，使用时需用辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液按比例稀释，一般为 1×120μL / 瓶（1：100） 。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液：1×10mL 装，用于稀释 HRP 偶联的亲和素 。
底物溶液（TMB）：1×10mL 装，与 HRP 发生显色反应，在 HRP 催化下 TMB 由无色变为蓝色 。
浓洗涤液：1×20mL 装，使用时需用蒸馏水或去离子水按一定比例（如 1：25）稀释，用于洗涤酶联板，去除未结合的物质，降低背景干扰 。
终止液：1×10mL 装，一般为 2N 的硫酸溶液，用于终止显色反应，使蓝色反应液转变为黄色 。
覆膜：多为 5 张，用于在温育过程中覆盖酶联板，防止液体蒸发和外界污染 。
使用说明书：1 份，详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等 。
血清：采集全血后，室温放置 2 小时或 4°C 过夜，随后以 1000×g 离心 20 分钟，小心吸取上清液用于检测 。收集血液应使用一次性无热原、无内毒素的试管 。
血浆：可选用乙二胺四乙酸（EDTA）或肝素作为抗凝剂 。标本采集后，需在 30 分钟内于 2 - 8°C 以 1000×g 离心 15 分钟，取上清备用 。
组织匀浆：先用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS，0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，che底去除残留血液（因匀浆中裂解的红细胞会干扰测量） 。称取适量组织并剪碎，按照约 1：9 的重量体积比（如 1g 组织对应 9mL PBS，可按需调整并记录），将剪碎组织与 PBS 加入玻璃匀浆器，在冰上充分研磨 。为进一步裂解细胞，可对匀浆液超声破碎或反复冻融 。最后，将匀浆液以 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清用于检测 。
细胞培养上清：将细胞培养上清以 1000×g 离心 20 分钟，去除杂质及细胞碎片，取上清即可用于检测 。
其他生物标本：如脑脊液、腹水等，一般以 1000×g 离心 20 分钟，取上清进行检测 。
标本采集后若在 1 周内检测，可保存于 4°C；若不能及时检测，需按一次使用量分装，冻存于 - 20°C（1 个月内检测）或 - 80°C（6 个月内检测），且应避免反复冻融，溶血标本不宜用于检测 。
准备工作：从冰箱取出试剂盒，提前 30 分钟平衡至室温，确保所有试剂温度与室温一致 。同时，将浓缩洗涤液按要求比例用蒸馏水或去离子水稀释备用 。
加样：设置空白孔、标准孔和待测样品孔 。空白孔加入 100μL 样品稀释液；标准孔分别加入不同浓度的标准品溶液 100μL；待测样品孔加入 100μL 待测样本 。加样时，将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡，随后用覆膜盖住酶联板，37°C 温育 120 分钟 。
洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上，轻轻拍干 。每孔加入 350μL 洗涤液，浸泡 1 - 2 分钟后，甩去洗涤液，再次拍干 。重复洗涤步骤 5 次，确保che底洗去未结合的物质 。
加生wu素标记抗体：每孔加入 100μL 稀释好的生wu素标记抗体工作液（临用前配制），覆膜后 37°C 温育 60 分钟 。
再次洗涤：温育完成后，按上述洗涤方法再次洗涤酶联板 5 次 。
加 HRP 偶联的亲和素：每孔加入 100μL 稀释好的 HRP 偶联的亲和素工作液，覆膜后 37°C 温育 60 分钟 。
第三次洗涤：重复洗涤步骤 5 次 。
显色：每孔加入 90μL 底物溶液（TMB），轻轻混匀，37°C 避光显色 。显色时间一般控制在 30 分钟内，期间需密切观察标准品孔的颜色变化，当肉眼可见标准品的前 3 - 4 孔有明显的梯度蓝色，后 3 - 4 孔梯度不明显时，即可进行下一步 。
终止反应：每孔加入 50μL 终止液，轻轻混匀，此时溶液颜色由蓝色立即转变为黄色 。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同，且底物反应时间到后应尽快加入终止液 。
读数：在加终止液后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长处测量各孔的光密度（OD 值） 。
计算结果：以标准品的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线 。可借助专业的曲线制作软件（如 Curve Expert 1.3 或 1.4），根据样品的 OD 值从标准曲线中查出相应的浓度，再乘以样品的稀释倍数，即为样品中白介素 8 受体（可溶性）的实际浓度 。
检测范围：不同试剂盒有所差异，常见检测范围为 15.6pg/mL - 1000pg/mL 等 。
灵敏度：通常可低至能检测出 3pg/mL 甚至更低浓度的可溶性白介素 8 受体 。
特异性：试剂盒对白介素 8 受体（可溶性）具有高度特异性，与其他结构类似物几乎无交叉反应 。
重复性：板内变异系数（CV）一般小于 10%，板间变异系数小于 15% 。
准确性：通过对已知浓度的可溶性白介素 8 受体标准品多次检测，测量值与理论值的偏差在合理范围，一般回收率在 80% - 120% 之间 。
试剂盒从冰箱取出后需平衡至室温方可使用，使用后应立即按要求保存试剂，避免试剂反复冻融 。
操作过程中应使用一次性吸头，防止交叉污染 。加样时，确保吸头垂直且深入孔底，避免液体挂壁或产生气泡 。
洗涤是关键步骤，洗涤不充分易导致假阳性结果 。若使用自动洗板机，需提前熟练掌握其操作方法，并定期校准 。
底物溶液对光敏感，应避光保存，使用过程中避免长时间暴露于光下 。显色反应需在 37°C 避光条件下进行，且严格控制显色时间 。
终止液具有腐蚀性，操作时应小心，避免接触皮肤和眼睛 。若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医 。
建议所有标准品和样本均做双份检测，以提高检测结果的准确性和可靠性 。如标本中待测物质含量过高，应先进行稀释，再重新测定，计算结果时需乘以相应的稀释倍数 。
不同批次的试剂盒内试剂不能混用，使用前应仔细核对试剂盒的有效期和批次号 。
该试剂盒仅用于科研用途，不得用于临床诊断 。
