CR1001 超级核酸酶(Benzonase Nuclease)
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生产厂家赛尔瑞成(北京)生命科学技术有限公司于2018年9月成立,位于中关村科技园区昌平园,专注于蛋白质组学、细胞生物学技术和产品的开发及应用。
赛尔瑞成(CRGEN)有专业的分子生物学平台、原核发酵平台、哺乳动物细胞培养平台、蛋白纯化和制剂平台,并配备了500平米GMP级洁净间及相关仪器设备。赛尔瑞成(CRGEN)可为客户提供优质的重组蛋白、多肽、多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体(包括纳米抗体、单链抗体、双特异抗体等)研发服务,以及细胞分离、培养、冻存等细胞生物学相关生物学试剂产品和技术服务。
赛尔瑞成(CRGEN)汇聚了一批分子生物学、免疫学、细胞生物学、生物工程等方面的专家,技术团队成员均来自国内外科研院所和生物技术企业,拥有雄厚的研发实力和产品开发经验。且技术团队常年从事抗体和重组蛋白的开发工作,曾承担国家“863”计划项目、国家重大新药创制项目、国家自然科学基金项目、省级科技攻关计划项目等,每年为客户提供200多种重组蛋白和重组抗体定制服务,开发的无血清细胞冻存液、GMP级细胞因子和重组蛋白、分子生物学等产品已广泛应用于科研领域。
赛尔瑞成(CRGEN)作为蛋白质组学和细胞生物学领域专业的技术服务和试剂产品优质供应商,期待与国内外用户开展广泛而深入地合作,共同推动生命科学的进步与发展。
一、产品简介
超级核酸酶(Benzonase Nuclease)是一种来源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens,也称灵杆菌)的非特异性核酸内切酶,也称全能核酸酶或广谱核酸酶。该核酸酶可在非常宽泛的条件下降解单链、双链、线状、环状、天然或变性等各种形式的DNA或RNA,产生长度为3至5个碱基的5'-单磷酸寡核苷酸。
超级核酸酶(Benzonase Nuclease)用途广泛,可用于在重组蛋白、病毒疫苗、抗体药物等生物制品生产过程中去除核酸,或用于降低细胞、组织、微生物等蛋白裂解液样品的粘度等(可以用于化学破菌而省去超声仪或高压均质机,或者结合化学破菌大幅度减少超声仪或高压均质机的工作负荷)。
本产品采用我公司自主研发的技术平台表达、纯化和制备,分子量约为52.3kDa。超级核酸酶(Benzonase Nuclease)活性部分与Serratia marcescens中的天然核酸内切酶氨基酸序列*一致。
二、产品性质
来源 | E. coli |
分子量 | 52.3 kDa |
纯度 | 不小于 95% ( SDS-PAGE ) |
等电点 | 6.19 |
酶活 | 不小于 200 U/μL |
最适酶活 pH | 8.0-9.2 (工作范围 pH 6.0-10.0 ) |
最适酶活温度 | 37℃ (工作范围 0℃-42℃ ) |
最适辅助因子 | 2mM Mg2+ (工作范围 1-10 mM ) |
蛋白酶活性残留 | 未检出 |
保存缓冲液 | 10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油 |
活性单位定义 | 在 37℃ , pH 8.0 反应条件下,在 30 min 内*消化 37 μg DNA 成为寡核苷酸的酶量(相当于使 △A260 吸收值变化 1.0 )定义为一个活性单( U )。 |
三、产品用途
1)有效去除各种重组蛋白制备过程中的核酸残留;
2)有效去除病毒疫苗和各种重组病毒中的核酸,以符合国家食药监局相关指南中关于核酸污染的要求;
3)有效降低细胞裂解液由于大量核酸存在而导致的粘度过大,以使裂解液易于后续操作;
4)有效降低大肠杆菌或其它工程菌裂解液粘度,大幅改善蛋白制备过程中菌体裂解液难过滤、难离心的问题,节约设备和人力成本;
5)在某些情况下,充分去除核酸可以提高包涵体蛋白的复性率;
6)在实时定量PCR测定重组病毒滴度时,用于去除病毒包装细胞的核酸和包装质粒污染;
7)有效防止细胞成团,在细胞培养液中或某些细胞冻存液中加入适量超级核酸酶,可以防止细胞成团,以利于后续细胞分析和检测。超级核酸酶没有蛋白酶的活性残留,本身也不会对健康细胞造成伤害,因此是防止细胞成团的理想选择。
8)在二维凝胶电泳(2-DE)的过程中,加入核酸酶可以提高蛋白质的分离效率和双向电泳的分辨率。
四、产品效果
五、运输和保存方法
低温运输(冰袋或干冰),-20℃保存,有效期3年。4℃保存一个月,酶活性没有明显变化。
六、常见化学试剂兼容条件
化学试剂 | 最佳条件 | 有效条件 |
DTT | 0-100 mM | 可以大于 100 mM |
2-Mercaptoethanol | 0-100mM | 可以大于 100mM |
Triton X-100 | -- | 小于 0.4% |
Urea | -- | 小于 5M |
SDS | -- | 小于 0.05% |
磷酸根离子 | 0-10 mM | 0-100 mM |
单价阳离子(如 Na + , K+ , NH4 + ) | 0-20 mM | 0-150 mM |
(NH4)2SO4 | -- | 小于 100mM |
七、使用方法示例(去除细胞裂解上清中的核酸)
1、样本准备
大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS或其它缓冲液清洗1次,8,000 rpm离心5 min,收集菌体沉淀。
贴壁细胞:去除培养基,用PBS清洗细胞,去除上清。
悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm离心10 min,收集细胞沉淀。
2、样品处理
将收集到的菌体或细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1:(10~20) 的比例进行裂解处理,可以在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞。
3、酶的添加
按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加超级核酸酶,也可以先进行预实验自行选择添加的酶量,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。
4、上清获取
以12,000 rpm的转速高速离心10-30min,去除沉淀,即获得菌体或细胞裂解液上清,再进行后续相关实验。
八、注意事项
1)若溶液为高盐溶液,偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。尽量按照上表“常见化学试剂兼容条件”表中的浓度范围调整待处理样品相关试剂的浓度,以使酶活性处于最大。
2)不建议-80ºC保存本产品,也不建议反复冻融,有可能会降低产品的酶活性,可以适当分装保存于-20ºC。
产品目录
货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价格 |
CR1001 | 超级核酸酶 | 25KU | 400 |
CR1002 | 超级核酸酶 | 50KU | 680 |
CR1003 | 超级核酸酶 | 100KU | 1300 |
本产品仅作为科研试剂使用!