CR3002 快速T4 DNA连接酶 T4 DNA Ligase (Rapid)
赛尔瑞成（北京）生命科学技术有限公司于2018年9月成立，位于中关村科技园区昌平园，专注于蛋白质组学、细胞生物学技术和产品的开发及应用。
赛尔瑞成（CRGEN）有专业的分子生物学平台、原核发酵平台、哺乳动物细胞培养平台、蛋白纯化和制剂平台，并配备了500平米GMP级洁净间及相关仪器设备。赛尔瑞成（CRGEN）可为客户提供优质的重组蛋白、多肽、多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体（包括纳米抗体、单链抗体、双特异抗体等）研发服务，以及细胞分离、培养、冻存等细胞生物学相关生物学试剂产品和技术服务。
赛尔瑞成（CRGEN）汇聚了一批分子生物学、免疫学、细胞生物学、生物工程等方面的专家，技术团队成员均来自国内外科研院所和生物技术企业，拥有雄厚的研发实力和产品开发经验。且技术团队常年从事抗体和重组蛋白的开发工作，曾承担国家“863”计划项目、国家重大新药创制项目、国家自然科学基金项目、省级科技攻关计划项目等，每年为客户提供200多种重组蛋白和重组抗体定制服务，开发的无血清细胞冻存液、GMP级细胞因子和重组蛋白、分子生物学等产品已广泛应用于科研领域。
赛尔瑞成（CRGEN）作为蛋白质组学和细胞生物学领域专业的技术服务和试剂产品优质供应商，期待与国内外用户开展广泛而深入地合作，共同推动生命科学的进步与发展。
详细信息
产品概述
T4 DNA Ligase催化双链DNA或RNA上相邻的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。
产品组分
T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)
来源
克隆有来自T4噬菌体DNA Ligase基因的重组E. coli菌株。
保存条件
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
单位定义
1单位指在50 μl 1 × T4 DNA连接酶反应缓冲液中，23℃反应条件下，30分钟能使50% 的经HindⅢ消化的λDNA片段(100 ng)连接所需的酶量。
反应缓冲液
2× Rapid Ligation Buffer
132 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6,000
10 × T4 DNA Ligase Buffer
500 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
注意事项
1. 建议插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1。
2. 平末端载体与片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，防止其自身环化。
3. dA-Tailing产物与DNA Adapter的摩尔浓度比在1:10 - 1:20。
4. T4 DNA Ligase不稳定，使用时冰上操作，用完立即放回-20℃。
实验案例1: DNA片段和载体DNA的连接
1. 在微量离心管中配制如下连接反应体系:
ddH2O | to 10 μl |
10 × T4 DNA Ligase Buffer | 1 μl |
插入片段a | 0.3 pmol |
载体DNAb | 0.03 pmol |
T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl) | 0.5 μl |
a. 插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1。
b. 平末端载体与片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，防止其自身环化。
2. 16°C过夜反应
3. 转化
4. 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不应超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30 min。
5. 将离心管置于42°C水浴，不要晃动，准确热激90 sec后，立刻置于冰水浴中，静置2 - 3 min。
6. 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm，37°C振荡培养45 min，使菌体复苏，抗性基因表达。
7. 5,000 rpm(2,500 × g)离心5 min，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10 min。
8. 待菌液被平板吸收后，37°C倒置培养过夜。
▲如果使用超级感受态细胞(转化效率>108 cfu/μg)，可直接吸取100 - 200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4°C保存，一周之内都可重新涂板。
实验案例2: DNA文库构建中接头连接反应
1. 在微量离心管中配制如下连接反应体系:
dA-Tailing产物a | 10 μl |
2 × Rapid Ligation Buffer | 15 μl |
DNA Adapter b | 2.5 μl |
T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl) | 1 μl |
ddH2O | 1.5μl |
用移液器轻轻吹打混匀
a. 产物为5'端磷酸化，3'端带dA的DNA片段。
b. dA-Tailing产物与DNA Adapter的摩尔浓度比在1:10 - 1:20。
2. 在PCR仪中进行连接反应:
30°C | 10 min |
4°C | Hold |
反应结束后，立即进行后续反应。
产品目录
货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价格 |
CR3001 | T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl) | 40000U | 125 |
CR3002 | T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl) | 200000U | 460 |
注：小包装需加收干冰费用
