1.预期用途：
RSR 公司的N型电压门控钙通道自身抗体RIA检测(N-VGCC Ab RIA)试剂盒专用于定量检测人血清中N型VGCC 自身抗体(N-VGCCAb)，仅供专业技术人员操作使用。
2.检测意义：
与N-VGCC 反应的血清自身抗体最初在与Lambert-Eaton肌无力综合征(LEMS)特异性相关的神经肌肉接头功能障碍中被报道。随后，在中枢神经系统疾病,包括小脑变性和副肿瘤性自身免疫，特别是与小细胞肺癌(SCLC)相关的疾病中检测到N-VGCC 抗体。功能性N-VGCC由一个成孔的α1 亚基和辅助亚基β，γ，α2/δ组成，广泛表达于中枢和外周神经系统。N-VGCC抗体主要与α1亚基结合。该试剂盒使用简单，为N型VGCCAb 提供了一种特异而灵敏的检测方法，是对RiaRSRTMVGCCAb RIA 试剂盒的补充，用于检测P/Q 型VGCC 自身抗体。
3. N型电压门控钙通道自身抗体RIA检测试剂盒特性：
临床特异性：用本试剂盒对59名健康志愿者血清进行检测，58例98.3%）均诊断为VGCC抗体阴性。
临床灵敏性:用本试剂盒对20例血清呈P/Q-VGCC抗体阳性的患者进行检测，6例(30%)均被诊断为N-VGCC抗体阳性。
临界值：阴性≤ 110 pmol/L; 阳性 >110 pmol/L
4.样本要求:
15µL 血清/人份（1:10稀释后每管为50 µL）,避免使用脂血、溶血及血浆样本。
5.组分性状:
25孔板，液体和冻干粉。
6.检测原理:
RSR N型电压门控钙通道自身抗体RIA检测试剂盒采用放射免疫沉淀法原理，将从兔小脑提取的P型VGCC蛋白复合物，并经过表面活性剂增溶及125I -ω-芋螺毒素MVIIC标记，形成125I-VGCC（放射标记抗原)。患者血清中VGCC 自身抗体与检测抗原相结合后，同IgG抗体形成免疫沉淀。免疫沉淀物的放射量与血清样本中抗体水平成正比，即自身抗体的浓度越高，免疫沉淀物的放射性就越强。
7. 实验步骤：
使用前所有试剂组分（除缓冲液外）需室温放置（20-25 ℃）至少 30 分钟。 |
加样: | 50 μL阴性质控品(B)(直接使用，不用稀释)、阳性质控品(C 1-2) (直接使用，不用稀释)和稀释的患者血清(用缓冲液1: 10稀释) |
加样: | 50 μL 125I标记的N-VGCC(A) (新鲜复溶)加入每个管子和两个额外的空管中用于总计数。 |
试管: | 盖好试管，使用旋涡混合器轻轻混匀。 |
孵育: | 2-8 ℃下，16-20 小时 |
加样: | 每管（不包括两个总计数管）加入50 μL抗人IgG(D)。 |
试管: | 盖好试管，使用旋涡混合器轻轻混匀。 |
孵育: | 2-8 ℃下，1.5 小时 |
加样: | 每管（不包括两个总计数管）加入1 mL冷的缓冲液(E)。 |
试管: | 使用旋涡混合器轻轻混匀 |
试管: | 4℃下 1500 g 离心 20 分钟 |
试管: | 弃去上清液 |
加样: | 每管（不包括两个总计数管）加入1 mL冷的缓冲液(E)。 |
试管: | 旋涡混合器重悬沉淀 |
试管: | 4 ℃下 1500 g 离心 20 分钟 |
试管: | 弃去上清液 |
使用γ射线计数仪对每管计数 1分钟 |
