Acme-packaging病毒包装试剂盒
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关于我们：
上海乐赛生物科技有限公司是一家专业从事生命科学科研和生产高品质试剂和耗材的研发、生产及销售的企业。由多位深耕于专业多年的精英团队创立，核心成员拥有丰富的从研发到市场的经验，帮助我们为客户提供更优质可靠的国产化产品和更灵活高效的服务。
我们的愿景是：
面向国内，走向国际，成为细胞类试剂和耗材的中国制造先头梯队。
我们的使命是：
通过提供优质细胞培养类产品，满足科研和生产对于产品高品质、快捷性和成本可靠的需求。
详细信息
在包装重组病毒的过程中，质粒转染是影响病毒包装效果的重要一步。本试剂盒是基于CaPO4法开发的病毒包装试剂盒，在293T细胞中有非常好的转染效果。
CaPO4法最初是作为检测病毒DNA传染性的一种技术而发展起来的，由CaPO4形成的沉淀通过增强DNA对细胞膜的吸附作用，促进哺乳动物细胞对DNA的摄取，从而达到转染的目的。CaPO4沉淀还限制了哺乳动物细胞内DNA酶对DNA的消化。
本试剂盒包含能够快速、简便、高效地对293T细胞进行质粒转染的必要试剂，可同时用于慢病毒和逆转录病毒的包装，可在100mm培养皿中进行20-50次转染。Solution 1和Solution2用于形成CaPO4沉淀；Solution3为本公司生产并经严格筛选的胎牛血清，用于病毒包装过程中添加到细胞培养基中；Solution 4为病毒包装增强试剂，可有效提过病毒包装效率；Solution 5为病毒感染增强试剂，用于靶细胞感染；Controlplasmid为EGFP慢病毒质粒，用于包装阳性对照病毒。
产品特点
►操作简单、快速、高效
产品成分
试剂名称 | 内容 | 规格 | 储存 条件 | |
-20T | -50T | |||
Solution 1 | 2.5M CaCl2 | 2ml | 5ml | -20℃ |
Solution 2 | 2×BBS | 10ml | 25ml | |
Solution 3 | Modified Fetal bovine serum | 10ml | 25ml | |
Solution 4 | Packaging Enhancer (1000×) | 100μl | 250μl | |
Solution 5 | Infection Enhancer (1000×) | 100μl | 250μl | |
Controlplasmid | CMV-EGFP | 40μg | 100μl | |
UltrapureH2O | H2O | 10ml | 25ml | 4℃ |
注：Solution 1、Solution 2应避免反复冻融，请根据实验情况分装使用。
其他所需材料
超纯水
293T (Acme-293T，东岭生物)
DMEM高糖培养基
Fetal bovine serum (FBSV500，东岭生物)
磷酸盐缓冲液 (PBS: 137 mM NaCl, 2.6 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, Adjust the pH to 7.4 with HCl)
操作流程
病毒包装
1.提前一天消化293T细胞，重悬于37℃预热的DMEM*培养基中（10%FBS，无抗生素，以下简称为D10），计数；
2.每个培养皿接种4.5×10^6细胞，10mlD10，轻轻晃动，将细胞*混匀；
3.在含5%CO2培养箱中37℃培养过夜（转染前细胞密度应达到60%-70%，可根据细胞生长速度对细胞接种量作调整）；
4.转染前3h配制含有2.5% Solution 3的DMEM培养基（以下简称为D2.5，不含双抗），37℃预热备用；
5.转染前2h吸去培养皿中培养基，每皿更换7ml上一步预热的D2.5，放入培养箱中备用，注意避免细胞脱落；
6.准备涡旋仪，70%酒精擦拭消毒后置于无菌操作台备用；
7.根据下表准备DNA混合液（该体系以慢病毒包装载体pMD2G和psPAX为例，为1个100mm培养皿用量)：
试剂 | 用量 |
pMD2G | 6μg |
PSPAX | 15μg |
慢病毒表达载体 | 20μg |
H2O | Add H2O to 450μl |
8.边涡旋边逐滴加入50μl Solution 1，以充分混匀；
注：以上所用试剂均需恢复至室温，阳性对照组用CMV-EGFP代替慢病毒表达载体。
9.在15ml离心管中准备等体积500μl Solution 2，在涡旋仪上快速涡旋，同时逐滴加入配制好的DNA混合液（该过程必须逐滴加入）；滴加结束后再涡旋5-10s；
注：因Solution 2 pH对温度非常敏感，必须恢复至室温后使用。10.将混合液室温孵育20min；
11.同时，在待转染细胞培养皿中加入8μl Solution 4，混匀后放于培养箱备用；
12.孵育结束后用移液枪或移液管轻轻混匀混合液，此时可见混合液略有浑浊；
注：混匀一定要轻柔，可通过吹泡泡(bubble mix）的方式混匀。13.将混合液逐滴均匀滴加至培养皿中，前后左右轻轻晃动培养皿，充分混匀；
14.将培养皿放于含3%CO2培养箱中培养；
15.12-16h之后（不超过16h），37℃预热DMEM无血清培养基（可用PBS代替）和D2.5；
16.吸去培养皿中培养基，用预热的DMEM无血清培养基轻轻洗2次，10ml/次，之后加入10ml上步预热的D2.5，混匀后置于含5%CO2培养箱中37℃培养；
17.转染36-48h后收集培养上清，2200rpm，4℃离心10min去除细胞碎片，置于4℃冰箱短期保存（不超过2天），或分装后于-80℃长期保存。
注：冻存的病毒应在冰上或4℃解冻，且避免反复冻融。18.收集的病毒上清可直接用于滴度测定，或浓缩后分装保存；
本公司同时提供病毒浓缩试剂（货号：GE-19002-50），可方便快捷高效地浓缩病毒，不需要超速离心机。
