动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒主要用途：动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出活性完整而高度纯化的线粒体细胞器的权wei而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于动物软组织（肝或脑组织）和培养细胞的活性线粒体的制备。其制备物产量高，活性保证，纯度可达99％。可以被用于线粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、能量代谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称同类产品最佳。

动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒技术背景:线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的zui常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。 

产品内容

清理液（Reagent A）          毫升

裂解液（Reagent B）          毫升

净化液（Reagent C）          毫升

强化液（Reagent D）          毫升

保存液（Reagent E）          毫升

活性液（Reagent F）          微升

高纯液（Reagent G）          毫升

产品说明书              1份

保存方式

保存净化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；高纯液（Reagent G），避免光照；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）严格无菌操作；有效保证6月

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液（G&VS12028）或PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清理细胞

硬组织处理液（Reagent G）：用于促进硬组织表面溶解

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离

*细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基

15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放

50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗

1.5毫升离心管：用于保存线粒体

4℃台式离心机：用于沉淀细胞

4℃超速离心机：用于分离细胞器成分和高质纯化

DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞

实验步骤

一、动物软组织线粒体分离（组织匀浆法）

实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）冻融，然后移取xx微升活性液（Reagent F）、 xx 净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量（注意：实验前最好使动物空腹12至24小时） 

2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入适量的（1克组织需要xx毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎组织

5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6． 加入预冷的xx毫升裂解工作液

7． 涡旋震荡5秒，充分混匀

8． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

9． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20至40下）（注意：参见注意事项6）

10． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

11． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g

12． 小心移出上清液到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞

13． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g

14． 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物

15． 加入xx微升保存液（Reagent E），充分混匀沉淀颗粒

16． 放进－70℃冰箱里备用或放进冰槽里继续后续操作

17． 移取xx毫升的高纯液（Reagent G）到6毫升超速离心管（注意：使用前摇匀高纯液(Reagent G)）

18． 轻轻加入xx微升线粒体混匀液在高纯液（Reagent G）的上面，避免震动

19． 放进4℃超速离心机离心45分钟，速度为40000g

20． 小心取出超速离心管：可见下端棕色或乳黄色样品带（注意：在其上端可能有溶酶体样品带） 

21． 小心抽去线粒体样品带以上的液体

22． 小心收集线粒体样品带到2毫升离心管（注意：用3毫升针筒和18号针头，置于样品带下缘小心缓慢抽吸）——此步骤获得高纯线粒体样品

23． 加入xx至xx毫升保存液（Reagent E）

24． 放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g

25． 小心抽去上清液

26． （选择步骤）重复实验步骤23至25一次

27． 加入xx微升保存液（Reagent E），混匀

28． 即刻移入到预冷的1.5毫升离心管

29． 放进－70℃冰箱里保存

关于我们：

上海极威生物科技有限公司成立于上海，经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长期专注于生物领域，旗下产品种类众多。上海极威秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，致力于发展中国的科研事业。力求为我国生物科技事业提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。

主营业务：

公司目前主营的产品有ELISA试剂盒、生化试剂、生化试剂盒、比色法试剂盒、标准品、对照品、抗体、细胞株、培养基、血清、酶、实验耗材、进口试剂及实验外包服务等。

应用领域：

公司产品在很多领域得到了广泛的应用，涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等各个领域。为各大高校、医院单位及各研究机构提供优质的产品。并长期与各高校、研究机构等建立了深厚的合作关系。