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植物总糖和还原糖检测试剂盒

型号
上海贝博生物科技有限公司

高级会员2年 

生产厂家

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蛋白提取,细胞分析

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详细信息

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
一年
检测方法
分光光度计
适用样本
植物
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.离心机
2.水浴锅或恒温箱
3.分光光度计

试剂准备
1.蒸馏水
2.氢氧化钠溶液
耗材准备
1.离心管
2.吸头
使用注意事项
1. 试剂盒里的低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降;
2. 待测样品如不能及时测定,请置于2-8℃保存,3天内稳定;
3. 如果样品还原糖浓度过高,用蒸馏水稀释后测定,结果乘以稀释倍数;
4. 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用,x0.9 是为了从测定出的总糖水解成单糖中,扣除水解时所消耗的水量。
使用方法
1. 还原糖的提取:
①称取植物样品0.5-3g,剪碎,加入蒸馏水约3ml匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。
②50℃水浴30min,并不时搅拌,以便还原糖浸出。
③将沉淀和浸出液转移至50ml离心管,4000g离心5min。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸馏水,混匀,再次4000g离心5min。
⑤留取上清液,将2次获得的上清液合并,用蒸馏水定容至100ml(提取液),混匀,作为还原糖待测液。

2. 总糖的水解和提取:
①称取植物样品0.5-3g,剪碎,加入蒸馏水约3ml匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。
②向容器中加入10ml 6M盐酸溶液,搅拌均匀,煮沸30min,并不时搅拌。
③取2滴滴加于载玻片上,滴加1滴显色液,检查水解是否,如已经水解,则不显示蓝色。
④水解完毕后,冷却至室温,加入6M氢氧化钠溶液,使溶液pH至7.4,用蒸馏水定容至100ml,混匀,4000g离心5min或过滤。
⑤取上清或滤液10ml,用蒸馏水定容至100ml,成稀释1000倍的总糖水解液(提取液),取1ml总糖水解液,测定其还原糖的含量。

3. 制作葡萄糖标准曲线:
取干净离心管或试管,按下表进行操作,以0号调零,检测540nm处吸光度,以吸光度值为纵坐标,各标准浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线。
4、还原糖测定:
取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液1ml,分别加入DNS检测液2ml,其余操作同标准曲线的操作,540nm处测定各管的吸光度。

5. 计算:
还原糖的百分含量:还原糖含量(%)=(C x VT)/(m x Vs) x 100

总糖的百分含量:总糖含量(%)=(C x VT)/(m x Vs) x 100x 10 x 0.9

式中:C=从标准曲线查的糖量(mg)
VT=提取液的体积(ml)
m=植物样品的质量(mg)
Vs=测定时用的样品体积(ml)

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