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总巯基检测试剂盒-微孔板
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蛋白提取，细胞分析
贝博生物专注于生命科学研究用试剂产品的研究、开发、市场推广和技术服务。致力于为中国广大客户提供量身定制的科研用试剂产品和专业技术服务，帮助科研人员加速生物领域的研究进展。 贝博生物将以高品质的产品和服务打造中国*实力的试剂品牌。
目前已上市了600多种蛋白提取试剂盒（动物、植物、细菌、昆虫、酵母等样本及细胞器提取）及上千种的细胞检测的相关产品-细胞凋亡、增殖毒性、细胞周期、膜电位检测、细胞器荧光探针、活性氧ROS检测、细胞自噬、细胞耗氧OCR、细胞外酸化率ECAR、缺氧检测、粘附检测、钙离子检测、膜通透性转换孔检测、膜流动性检测、外泌体、囊泡提取等。
详细信息
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰盒
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.96孔板
2.吸头
2.吸头
使用注意事项
1.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
2.血清/培养液等液体样本直接检测或用生理盐水稀释后检测。
3.检出限为10μmol/L。
2.血清/培养液等液体样本直接检测或用生理盐水稀释后检测。
3.检出限为10μmol/L。
使用方法
1. 样品准备
组织样本：按照组织质量（g）：生理盐水体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 生理盐水）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清，培养液：直接测定。
2. 试剂配制：
使用前，准确吸取10ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存。
3. 酶标仪预热30min，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
4. 总巯基的测定
按下表在96孔板中加入试剂，对照孔每个样品均做。
混匀，25℃静置10min，测定412nm 吸光值。
ΔA=A 测定-A 对照。
【注】：
如果OD值太大，可以将样品用试剂A稀释后再检测。
5. 计算
血清中总巯基含量（mmol/L）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷V 样×103
=5800×ΔA
组织细胞中总巯基含量（mmol/g）
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
=5.8×ΔA÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样×Cpr）
=5.8×ΔA÷Cpr
【注】：
V 反总：反应总体积，0.2mL；
V 样：反应中样品体积，0.04mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样品质量，g ；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
组织样本：按照组织质量（g）：生理盐水体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 生理盐水）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清，培养液：直接测定。
2. 试剂配制：
使用前，准确吸取10ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存。
3. 酶标仪预热30min，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
4. 总巯基的测定
按下表在96孔板中加入试剂，对照孔每个样品均做。
混匀，25℃静置10min，测定412nm 吸光值。
ΔA=A 测定-A 对照。
【注】：
如果OD值太大，可以将样品用试剂A稀释后再检测。
5. 计算
血清中总巯基含量（mmol/L）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷V 样×103
=5800×ΔA
组织细胞中总巯基含量（mmol/g）
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
=5.8×ΔA÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样×Cpr）
=5.8×ΔA÷Cpr
【注】：
V 反总：反应总体积，0.2mL；
V 样：反应中样品体积，0.04mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样品质量，g ；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
