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蛋白质总巯基检测试剂盒（总半巯基）
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该企业相似产品
蛋白提取，细胞分析
贝博生物专注于生命科学研究用试剂产品的研究、开发、市场推广和技术服务。致力于为中国广大客户提供量身定制的科研用试剂产品和专业技术服务，帮助科研人员加速生物领域的研究进展。 贝博生物将以高品质的产品和服务打造中国*实力的试剂品牌。
目前已上市了600多种蛋白提取试剂盒（动物、植物、细菌、昆虫、酵母等样本及细胞器提取）及上千种的细胞检测的相关产品-细胞凋亡、增殖毒性、细胞周期、膜电位检测、细胞器荧光探针、活性氧ROS检测、细胞自噬、细胞耗氧OCR、细胞外酸化率ECAR、缺氧检测、粘附检测、钙离子检测、膜通透性转换孔检测、膜流动性检测、外泌体、囊泡提取等。
详细信息
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂A低温保存后可能会有结晶析出，可以置室温摇匀溶解或者37℃水浴溶解摇匀。
2.试剂A低温保存后可能会有结晶析出，可以置室温摇匀溶解或者37℃水浴溶解摇匀。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
蛋白质、抗体等
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.比色皿
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
使用注意事项
1.试剂A低温保存后可能会有结晶析出，可以置室温摇匀溶解或者37℃水浴溶解后摇匀再使用。
2.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
3.试剂C2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失
2.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
3.试剂C2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失
使用方法
试剂配制：
1. 使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存备用。
2. 使用前，准确吸取10 ml试剂C1加入试剂C2干粉，充分溶解混匀，即成试剂C工作液，4℃避光保存备用。
【注】：
一次用不完的试剂工作液可以根据实验需要分装后-20℃冻存。
样本处理：
1. 蛋白质/抗体等液体样本：直接检测或稀释后检测。
检测前进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。
2. 固体粉末用试剂A溶解后测定。蛋白浓度范围在1-10mg/ml均可。
进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。
总巯基的测定
1. 待测蛋白样品100 μl加入700 μl试剂A，充分混匀，室温或37℃静置1-4小时。
2. 再加入100 μl试剂B工作液，充分混匀，在室温或37℃静置10-30分钟。
3. 加入100 μl试剂D，充分混匀。
4. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
【注】：
可以4℃静置过夜。
5. 在4℃，12000×g以上条件下离心10分钟。
6. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。
【注】：
尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。
7. 加入100 μl试剂E到离心管中，洗涤沉淀。在4℃，12000×g条件下离心10分钟。小心移除弃上清，留沉淀。
【注】：
重复此步骤两次。
尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。
8. 用900 μl试剂F溶解沉淀。
【注】：
用移液器充分吹打混匀。
沉淀不好溶解时可以超声助溶。
9. 加入100 μl试剂C工作液，充分混匀。
10. 置室温静置10分钟。412 nm，0.5 cm光径，测定OD值。
巯基含量计算：
总半巯基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）
= 测定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
以上以0.5cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
【注】：
14.15 mM/cm为毫摩尔消光系数；
0.5 cm为光径；
10 为反应总体积/样品取样量
1. 使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存备用。
2. 使用前，准确吸取10 ml试剂C1加入试剂C2干粉，充分溶解混匀，即成试剂C工作液，4℃避光保存备用。
【注】：
一次用不完的试剂工作液可以根据实验需要分装后-20℃冻存。
样本处理：
1. 蛋白质/抗体等液体样本：直接检测或稀释后检测。
检测前进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。
2. 固体粉末用试剂A溶解后测定。蛋白浓度范围在1-10mg/ml均可。
进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。
总巯基的测定
1. 待测蛋白样品100 μl加入700 μl试剂A，充分混匀，室温或37℃静置1-4小时。
2. 再加入100 μl试剂B工作液，充分混匀，在室温或37℃静置10-30分钟。
3. 加入100 μl试剂D，充分混匀。
4. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
【注】：
可以4℃静置过夜。
5. 在4℃，12000×g以上条件下离心10分钟。
6. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。
【注】：
尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。
7. 加入100 μl试剂E到离心管中，洗涤沉淀。在4℃，12000×g条件下离心10分钟。小心移除弃上清，留沉淀。
【注】：
重复此步骤两次。
尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。
8. 用900 μl试剂F溶解沉淀。
【注】：
用移液器充分吹打混匀。
沉淀不好溶解时可以超声助溶。
9. 加入100 μl试剂C工作液，充分混匀。
10. 置室温静置10分钟。412 nm，0.5 cm光径，测定OD值。
巯基含量计算：
总半巯基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）
= 测定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
以上以0.5cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
【注】：
14.15 mM/cm为毫摩尔消光系数；
0.5 cm为光径；
10 为反应总体积/样品取样量
常见问题分析
1.巯基含量低于预期？
可能是样品中的游离巯基已经被氧化。
需要限度地减少样品制备与分析之间的时间间隔，尽快完成分析测定。可以在样品中加入1-5 mM 的EDTA以螯合可能氧化巯基的二价金属离子。
2.需要绘制标准曲线吗？
由于Ellman反应的显色产物摩尔消光系数高且稳定，因此可以不必绘制标准曲线，直接通过摩尔消光系数计算即可。
如果需要可以选择贝博其它含有标准品的试剂盒（相关产品：BB-472462或者BB-472463）。
如果需要自行绘制标准曲线，可以使用半盐酸盐一水合物（CAS#：7048-04-6 MW=175.63）做标准品，用反应缓冲液配制1.5 mM的标准品，然后分别稀释成1.25 mM、1.0 mM、0.75 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0 mM等不同浓度的标准品。取900 μl加入100 μl试剂C工作液，充分混匀。置室温静置10分钟。412 nm，测定OD值。
可能是样品中的游离巯基已经被氧化。
需要限度地减少样品制备与分析之间的时间间隔，尽快完成分析测定。可以在样品中加入1-5 mM 的EDTA以螯合可能氧化巯基的二价金属离子。
2.需要绘制标准曲线吗？
由于Ellman反应的显色产物摩尔消光系数高且稳定，因此可以不必绘制标准曲线，直接通过摩尔消光系数计算即可。
如果需要可以选择贝博其它含有标准品的试剂盒（相关产品：BB-472462或者BB-472463）。
如果需要自行绘制标准曲线，可以使用半盐酸盐一水合物（CAS#：7048-04-6 MW=175.63）做标准品，用反应缓冲液配制1.5 mM的标准品，然后分别稀释成1.25 mM、1.0 mM、0.75 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0 mM等不同浓度的标准品。取900 μl加入100 μl试剂C工作液，充分混匀。置室温静置10分钟。412 nm，测定OD值。
参考文献
1.HanQuanWen et al.
Effect of chirality of cysteine on the cell growth and photo-fermentative hydrogen production by using acetate as substrate
Fuel 2021 （IF=6.609）
2.Yan Yan et al.
Nanosized functional miRNA liposomes and application in the treatment of TNBC by silencing Slug gene
International Journal of Nanomedicine 2019 （IF=6.400）
3.HanQuanWen et al.
Enhanced photo-fermentative hydrogen production by synergistic effects of formed biofilm and added L-cysteine
Renewable Energy 2019 （IF=8.001）
4.MengGe Sun et al.
Targeting Epirubicin Plus Quinacrine Liposomes Modified with DSPE-PEG2000-C(RGDfK) Conjugate for Eliminating Invasive Breast Cancer
Journal of Biomedical Nanotechnology 2015 （IF=5.068）
Effect of chirality of cysteine on the cell growth and photo-fermentative hydrogen production by using acetate as substrate
Fuel 2021 （IF=6.609）
2.Yan Yan et al.
Nanosized functional miRNA liposomes and application in the treatment of TNBC by silencing Slug gene
International Journal of Nanomedicine 2019 （IF=6.400）
3.HanQuanWen et al.
Enhanced photo-fermentative hydrogen production by synergistic effects of formed biofilm and added L-cysteine
Renewable Energy 2019 （IF=8.001）
4.MengGe Sun et al.
Targeting Epirubicin Plus Quinacrine Liposomes Modified with DSPE-PEG2000-C(RGDfK) Conjugate for Eliminating Invasive Breast Cancer
Journal of Biomedical Nanotechnology 2015 （IF=5.068）
