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碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒5
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蛋白提取，细胞分析
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详细信息
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.可见分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
2.吸头
使用注意事项
1.待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂。
2.样品避免反复冻融。
3.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
4.所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
5.空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
6.加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
2.样品避免反复冻融。
3.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
4.所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
5.空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
6.加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
使用方法
样品测定：
1. 配制标准品工作液
取出试剂D：标准品1mg/ml恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml的试剂E：ddH2O中，使浓度为0.05mg/ml，即为标准品工作液。
参照下表稀释系列标准品溶液
2. 样品准备：
1) 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要需适当匀浆；低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸脂酶的检测；
2) 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定；尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照；
3) 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
3. 加样：
依照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再测定。样品的检测能设置平行管。
立即混匀，510nm，0号管（ddH2O）调零，测各管吸光度。
计算公式：
碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：
在37℃条件下，100ml待测样品与显色底物（即ALP显色液所含物质）作用15分钟，产生1mg酚为一个金氏单位。
以系列标准品工作液（1~5号管）对应的金氏单位为X轴，以相应的标准管吸光度（1~5号管）为Y轴，绘制标准曲线。
以测定管与空白管的吸光度值的差额为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，算出酶活力单位。
1. 配制标准品工作液
取出试剂D：标准品1mg/ml恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml的试剂E：ddH2O中，使浓度为0.05mg/ml，即为标准品工作液。
参照下表稀释系列标准品溶液
2. 样品准备：
1) 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要需适当匀浆；低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸脂酶的检测；
2) 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定；尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照；
3) 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
3. 加样：
依照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免气泡的产生。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再测定。样品的检测能设置平行管。
立即混匀，510nm，0号管（ddH2O）调零，测各管吸光度。
计算公式：
碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：
在37℃条件下，100ml待测样品与显色底物（即ALP显色液所含物质）作用15分钟，产生1mg酚为一个金氏单位。
以系列标准品工作液（1~5号管）对应的金氏单位为X轴，以相应的标准管吸光度（1~5号管）为Y轴，绘制标准曲线。
以测定管与空白管的吸光度值的差额为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，算出酶活力单位。
