提到蛋白提取,大家不约而同会想到RIPA裂解液,裂解液加入样品中,离心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我们真的用对了吗?RIPA裂解液是从动物细胞或组织中提取蛋白的常用裂解液,其工作原理是利用去污剂(表面活性剂)裂解细胞膜和核膜,从而获取细胞和组织中的RIPA可溶性蛋白。
RIPA裂解液的选择
RIPA裂解液中主要包含去污剂,缓冲体系,等渗体系,变性剂、稳定剂等。其中去污剂是细胞裂解液中重要成分,是由疏水尾端基团和极性亲水头端基团组成的两性分子,它们能够降低水的表面张力,所以也被称为表面活性剂,起到破坏脂质双分子层、破裂细胞以及溶解蛋白等作用。
去污剂的类型
不同类型的去污剂对样品的裂解效率有所不同,RIPA裂解液有多种配方,通常会使用不同类型的去污剂组合和不同的去污剂浓度,故不同配方的RIPA裂解液能溶解出的蛋白量和蛋白种类会有较大差异,获得的蛋白图谱会有所不同,从而导致后续实验的检测结果也会产生差异结果。需要根据实验样品和下游实验尝试选择合适的RIPA裂解液配方。
使用ripa裂解液的注意事项
• 由于多数RIPA裂解液裂解强度较为温和,对胞质中的可溶性蛋白和部分高表达于细胞膜、细胞核上的蛋白提取较为有效,故RIPA裂解液适于这类蛋白的提取,推荐用于WB实验中的定性检测。
• RIPA裂解液提取蛋白时,经离心后会产生两个组分即RIPA可溶组分(上清)和RIPA不可溶组分(白色沉淀),属正常情况。尽量避开沉淀吸取上清用于下游实验。
• 如样品加入RIPA裂解液后出现较为黏稠状态,说明样品裂解过于充分,无法去除核酸残团的情况下,需要使用强度更低的裂解液配方,增加超声处理或更换总蛋白提取试剂盒(李记生物Cat:AP01L204),柱式法可以利用离心柱将核酸残团进行截留解决样品黏稠问题,无不可溶组分,可获得更完整的蛋白图谱。
• 使用RIPA裂解液提取组织样品时,由于组织样品差异较大,从不同样品中高效提取组织蛋白具有挑战性,例如纤维组织和胶原组织(如心脏和肾脏)和软组织(如脾脏和肝脏)需要采用不同的研磨方案匹配,才能获得较佳结果。
ripa裂解液推荐
【货号】:AP01L013、AP01L014
【规格】:50mL、100mL
【品牌】:李记生物