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外周血分离PBMC用于细胞培养实验服务

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上海达为科生物科技有限公司

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详细信息

外周血分离PBMC用于细胞培养实验服务

外周血分离PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)是免疫学研究中的一项常规技术。

以下是基于最新信息的实验步骤:

1.血液采集与抗凝:首先,使用含有肝素的抗凝管采集新鲜外周静脉血。

2.血液稀释:按照1:1的比例将抗凝全血与稀释洗涤液(如PBS或RPMI-1640)混合,以降低血液的粘稠度,便于后续操作。

3.密度梯度离心:向无菌离心管中加入适量的Ficoll密度梯度分离液,将稀释后的血液样品小心地置于分离液上方,保持两液面界面清晰。离心条件一般为800g,室温下离心20-30分钟。

4.收集PBMC:离心后,血浆层位于上层,PBMC层(白色薄膜)位于中间,红细胞层位于下层。使用移液枪或吸管小心吸取PBMC层,转移至新的离心管中。

5.洗涤细胞:向含有PBMC的离心管中加入适量的稀释洗涤液,低速离心去除血浆和Ficoll,重复洗涤1-2次以净化细胞。

6.重悬细胞:洗涤后,用稀释洗涤液重悬PBMC,计数细胞数量,并根据需要进行后续实验。

外周血分离PBMC用于细胞培养实验服务注意事项

1.使用新鲜血液进行分离,以保证细胞活性。

2.整个操作过程应轻柔,避免对细胞造成机械性损伤。

3.离心速度和时间应严格控制,以确保有效分离而不破坏细胞结构。

4.使用电子束灭菌的分离管和无热源、无核酸酶的试剂,以保证实验的准确性和细胞的完整性。

以上步骤结合了最新的实验操作指南和技术建议,确保了实验的时效性和准确性。在进行实验时,应遵循最新的实验协议和安全指南。


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