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Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒
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南京赛泓瑞生物科技有限公司专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
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公司设立质量管理部，建立了高标准的质检系统，产品从原料、半成品、成品入库到销售之前，每一个环节都有严格的质检标准，并以标准的生产工艺，保证产品质量的稳定性。
详细信息
Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒（膜联蛋白A5-PE细胞凋亡检测试剂盒）（胎盘抗凝蛋白-PE细胞凋亡检测试剂盒）
凯基Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒
（Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at4℃ for one year
Expire date：
一、试剂盒说明
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素PE标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。可与7-AAD联合使用。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不*用于检测组织样本）。
二、试剂盒组份
| 组份 | Cat: KGA1011 10 assays | Cat: KGA1012 20 assays | Cat: KGA1013 50 assays | Cat: KGA1014 100 assays | 储存条件 |
| AnnexinV-PE | 10μL | 20μL | 50μL | 100μL | 4℃避光 |
| Binding Buffer | 5 mL | 10.0 mL | 25 mL | 50 mL | 4℃ |
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液
四、使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-PE避光保存及使用。
3． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不*用于检测组织样本。
4． *使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
5． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
6． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
五、操作方法
1． 悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）；
2． 用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
3． 加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞；
4． 加入1μL Annexin V-PE混匀；
5． 室温、避光、反应5～15min；
6． 请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A． 荧光显微镜观察
1． 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2． 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1） 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2） 用PBS洗涤细胞两次；
（3） 在500μL 的Binding Buffer中加入1μL Annexin V-PE混匀；
（4） 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5） 避光、室温反应5 min。
3． 将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下滤光片（罗丹明）观察
Annexin V-PE荧光信号呈橙红色。
B． 流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=578 nm。
Annexin V-PE的橙红色荧光建议使用FL2通道检测。
荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
