移植后的缺血再灌注损伤 （IRI） 是由宿主中性粒细胞介导的，宿主中性粒细胞在外渗时启动 NETosis 并诱导同种异体移植物损伤 。肺移植后，IRI 导致超过 50% 的肺受者出现原发性移植物功能障碍，这是早期死亡和慢性排斥反应的主要危险因素，以及晚期死亡。虽然中性粒细胞耗竭可以改善 IRI，但它也会损害宿主的病原体定向反应。因此，阐明中性粒细胞转运到同种异体移植物中的机制对于开发临床适用的 IRI 疗法至关重要。
根据细胞表面标志物，血液单核细胞可分为非经典亚型和经典亚型。经典单核细胞的特征是细胞表面分子 Ly6C 的高表达和趋化因子受体 CCR2 的存在。它们是在循环中发现的主要单核细胞，它们在那里调查器官空间并容易对炎症线索做出反应。经典单核细胞通常被认为是“促炎性”，因为它们很容易被募集到感染性和无菌性炎症部位，在那里它们精心构建促炎细胞因子并分化为巨噬细胞和树突状细胞。相比之下，非经典单核细胞缺乏 CCR2 表达，但表达低水平的 Ly6C 和高水平的 fractalkine 受体 CX3CR1。这些细胞以 CX3CR1 依赖性方式在微血管系统中巡逻，尽管对非经典单核细胞的发育和功能知之甚少，但最近的研究表明这种单核细胞亚型与各种炎症过程有关。单核细胞在介导中性粒细胞迁移到受伤组织中的确切作用尚不清楚。我们最近发现，供体来源的非经典单核细胞通过产生中性粒细胞趋化因子 MIP-2 是早期中性粒细胞募集所必需的，并且这些细胞的耗竭可改善肺 IRI。有趣的是，使用活体 2 光子成像，我们之前已经观察到循环单核细胞促进中性粒细胞运输到新鲜再灌注的肺中。此外，我们发现，当肺移植受者缺乏 CCR2 表达时，肺移植物功能会显著改善，这会损害经典单核细胞向肺移植物的募集。由于中性粒细胞募集到组织和外渗到血管外间隙对于肺 IRI 的起始和传播都是必要的，因此可以假设经典单核细胞对于中性粒细胞外渗可能是需要的。因此，我们假设非经典单核细胞和经典单核细胞可能在 IRI 的发展中具有互补作用，其中非经典单核细胞为白细胞募集提供初始信号，而宿主来源的经典单核细胞对于中性粒细胞外渗到受伤的肺部至关重要。
在人肺同种异体移植物和小鼠模型中，我们发现 IRI 与经典单核细胞和中性粒细胞募集到受伤的肺部有关。经典单核细胞是从宿主脾脏动员的，是中性粒细胞外渗所必需的，因为 CCR2 + 经典单核细胞的药理学耗竭以及脾切除术消除了中性粒细胞外渗，而初始脾切除术后的异位脾移植挽救了损伤。为了实现临床相关性，我们在原位血管化小鼠肺移植模型中验证了这些发现。我们发现宿主脾切除术改善了 IRI，而用脾源性经典单核细胞重建可恢复 IRI。中性粒细胞外渗是由经典单核细胞产生 MyD88 依赖性 IL-1β 介导的，这导致肺血管内皮细胞中 ZO-2 的下调，ZO-2 是一种与跨膜紧密连接蛋白相互作用的细胞质蛋白。IL-1β 介导的 ZO-2 下调足以增加内皮通透性。因此，我们的工作揭示了我们认为以前未被认识的机制，即从脾脏动员的经典单核细胞促进 IRI 后募集的中性粒细胞外渗到肺部。
构建小鼠疾病模型后，对于我们需要研究的细胞群体，我们能拿到细胞群体在模型中的监测数据，比如数量动态曲线，功能动态曲线或者别的状态的数据。不管是数量还是质量的动态监测，对我们后续建议清除剂体系，给药时间点和持续时间，都有精准的指导作用。对于肺缺血再灌注模型中肺脏各种细胞群体的变化曲线和清除评价解决方案，可以参考这篇文献。
论文信息：
论文题目： Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1β
期刊名称：J Clin Invest.
时间期卷：2018;128(7):2833–2847
在线时间：2018年5月21日
DOI：doi.org/10.1172/JCI98436.
Clodronate Liposomes氯膦酸盐脂质体产品信息：
货号：CP-005-005
规格：5ml+5ml
品牌：Liposoma
产地：荷兰
名称：Clodronate Liposomes and Control Liposomes
办事处：Target Technology（靶点科技）
肺脏缺血再灌注模型中，NK细胞，肺泡巨噬细胞AM，嗜酸性粒细胞EOS，肺间质巨噬细胞IM，型树突状DC细胞，非经典单核细胞NCM数量曲线。
NK: NK cells;
AM: alveolar macrophages;
Eos:eosinophils;
IM: interstitial macrophages;
MoDC: monocyte-derived dendritic cells;
NCM: non-classical monocytes;
DC: dendritic cells
通过这个数据，我们也可以看到，荷兰Liposoma的巨噬细胞清除剂Clodronate Lipoosoemes不会清除DC细胞。其次，对于比较巨噬细胞清除和不清除组别时，建议选择Control试剂，就是PBS Liposomes（Control）。对于异物颗粒，Lisposomes会引起吞噬细胞的反应。当我们选择了严格对照，可以降低本地，便于数据后续分析。咱们可以看这个数据，NCM在PBS-lip组相对于WT的IR组，有显著增加。当然，这个还需要看时间点。一过性的增加和能否引起进一步反应，正是研究颗粒度的细节体现。
