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超分辨率显微镜平台LiveCodim是一个通用的超分辨率成像平台,具有任何标准荧光显微镜使用的接口。它是高分辨率、低光毒性的活体成像解决方案。
超分辨率显微镜平台应用
超分辨率显微镜平台建立了一种新的超分辨率成像模式,为SR在细胞生物学中的主要关键挑战提供了答案:保持生物样品的完整性、技术复杂性。
超分辨率显微镜平台包含一个通用的附加组件,用于任何标准显微镜。它包括宽视场、共焦和超分辨率模式,以提供一个完整的解决方案,特别适合改装。
这项技术基于获得patent的锥形衍射显微镜(CODIM)强大的光束整形器,能产生可控的和局部的光模式,用于扫描光毒性非常低、光漂白可以忽略的生物样品。
超分辨率显微镜平台工作步骤
第一步:
在共焦显微镜上设置定期实时观察,并优化图像采集设置。
第二步:
将所需区域放置在整个视野的中心,并执行5倍共焦放大。
第三步:
选择要在超分辨率模式下成像的感兴趣区域,并定义CODIM采集设置。
第四步:
启动CODIM超分辨率采集,然后在共焦窗口中确认结果。
第五步:
反复重复这个过程,检查多个区域。
超分辨率显微镜平台优势
•高性能超分辨率多色成像| 4个荧光通道
•分辨率更好或等于120 NM XY |使用光结构和扫描点方法提高分辨率
•活体细胞成像׀低光毒性和低光漂白使体内SR研究成为可能
•穿透深度׀Z叠加能力和“抑制”来自其他平面的信号
•标准样品制备׀标准荧光显微镜样品制备流程
•与所有荧光显微镜无缝集成
•精简易用的应用׀自主处理算法,无需用户调整多个参数
超分辨率显微镜平台技术
锥形衍射光束整形器
2006年,gabriely.Sirat证明了锥形衍射可以作为一种实用的光束整形工具,并建议创建一种多功能的光束整形器,并将其应用于超分辨荧光显微镜。薄双轴晶体将规则入射光束的点扩散函数(PSF)转化为一系列广泛的光分布,分布的选择由输入和输出偏振控制。
实际上,光束整形是通过在可控偏振器之间封闭双轴晶体来实现的;这种简单的光学装置,类似于偏振计,能够在微秒甚至更快的时间内从一种模式切换到另一种具有不同拓扑结构的模式。此外,这些图案是*共局域化的,因为它们是由相同的主光束产生的。
利用CODIM实现超分辨率
CODIM光束整形器被用作共焦模块的附加组件,并在样品上扫描分布,为每个扫描点产生几个显微图像。由于点扫描的几何结构,我们的系统创建了一个减少的漫射光数量相比,基于广域技术。
CODIM光束整形器使用锥形衍射原理产生紧凑的局部光分布。每个显微图像包含大量的高频,接近阿贝极限(与艾里模式相比,高达3倍)(图4)。
投影在样品上的这些光分布是使用复杂的专有算法进行分析的。这允许重建超分辨率图像,对于一般物体,分辨率提高到2倍。此外,这些算法,利用正约束和稀疏性,允许分辨率进一步提高,为足够的样本。
最终,低得多的峰值功率分布、高量子产率相机的使用以及更长的相机曝光时间的结合,大大降低了发送到样品的光的峰值功率和能量。这就是这种方法光漂白和光毒性很低的原因。这也避免了荧光团饱和的问题,使该方法线性和定量。