非洲猪瘟检测方案
时间：2023-05-05 阅读：706
Ø 1 非洲猪瘟简介
非洲猪瘟（英文名称：African Swine fever，简称：ASF）是由非洲猪瘟病毒（英文名称：African Swine fever virus，简称：ASFV）感染家猪和各种野猪（如非洲野猪、欧洲野猪等）引起一种急性、出血性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟科非洲猪瘟病毒属的重要成员，病毒有些特性类似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直径为175－215纳米，呈20面体对称，有囊膜。基因组为双股线状DNA，大小170－190kb。在猪体内，非洲猪瘟病毒可在几种类型的细胞浆中，尤其是网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖，并使其成为主要的传播媒介。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一类动物疫情。
Ø 2 非洲猪瘟在我国的发病情况
自2018年8月3日我国确诊非洲猪瘟疫情以来，我国已经在辽宁、安徽、黑龙江、海南等地接连爆发非洲猪瘟疫情。尽管非洲猪瘟传入我国仅几年的时间，但已经在多地接连爆发，造成了巨大的经济损失，而且非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊。在目前的情况下，急需一种能对非洲猪瘟进行快速检测的方案！
Ø 3 非洲猪瘟病毒(ASFV)实时等温扩增仪配置清单
项目 | 序号 | 物品名称 | 型号规格 | 单位 | 数量 | 备注 |
主 机 箱 | 1. | 仪器主机 | HW-ZW16 | 台 | 1 | |
2. | 仪器使用说明书 | 个 | 1 | |||
3. | 合格证/保修卡 | 本 | 2 | |||
4. | 仪器电源线 | 根 | 1 | |||
5. | 铝合金箱 | 个 | 1 | |||
配 件 箱 | 6. | 电子天平 | 0-500g | 台 | 1 | |
7. | 样品杯 | 50mL | 个 | 24 | ||
8. | 移液枪 | 1-5ml | 把 | 1 | ||
9. | 移液枪枪头 | 1-5ml | 包 | 1 | ||
10. | 移液枪 | 100μL-1000μL | 把 | 1 | ||
11. | 移液枪枪头 | 100μL-1000μL | 包 | 1 | ||
12. | 移液枪 | 10μL-100μL | 把 | 1 | ||
13. | 移液枪枪头 | 10μL-100μL | 包 | 1 | ||
14. | 移液枪 | 2μL-20μL | 把 | 1 | ||
15. | 移液枪枪头 | 2μL-20μL | 包 | 1 | ||
16. | 剪刀 | 把 | 1 | |||
17. | 镊子 | 把 | 1 | |||
18. | 研钵 | 直径8cm | 个 | 1 | ||
19. | 离心机 | 大龙D1008 | 台 | 1 | ||
20. | 离心管 | 1.5mL | 个 | 50 | ||
21. | PCR管 | 0.2mL | 个 | 50 | ||
22. | 非洲猪瘟病毒荧光等温扩增检测试剂 | 48T/盒 | 盒 | 5 | ||
重 要 配 件 | 23. | 漩涡混匀器 | 台 | 1 | ||
24. | 畜牧恒温箱 | -10℃~65℃ | 台 | 1 | ||
25. | 高速冷冻离心机 | LC-LX-HR165A | 台 | 1 | ||
26. | 研磨仪 | 台 | 1 | |||
27. | 移液器（5种型号） | 支 | 10 | |||
28. | 冰箱 | 台 | 1 |
Ø 4 非洲猪瘟病毒(ASFV)实时等温扩增仪技术参数
仪器型号 | HW-ZW16 |
样品通量 | 16x0.2ml，兼容单管和8联管 |
加热方式 | 半导体制冷片结合电性电阻热红外技术 |
温控范围 | 室温～85℃ |
温控精度 | ±0.1℃ |
温度均一性 | ±0.15℃ |
激发光波长 | 第一通道：470nm±10nm |
检测光波长 | 第一通道：520nm±10nm |
激发光 | 高亮度LED |
检测器 | 新型光学检测器，结合数字电路控制，光信号稳定 |
荧光传导方式 | 太空专用光纤传导 |
结果判读方式 | 根据扩增曲线软件自动判读阴阳性 |
结果显示 | 可在机器显示扩增曲线及出峰时间 |
检测时间 | ≤40分钟 |
检测试剂 | 开放式恒温荧光检测试剂 |
操作软件 | 自带软件 |
控制方式 | 触屏控制 |
检测项目 | 可同时最多检测16个项目 |
检测灵敏度 | 10～109拷贝/反应，且样品间无交叉污染 |
仪器分析功能 | 根据所检测样品，直接分析判定阳性或阴性；也可通过标准品进行绝对定量 |
软件设置功能 | 可选择反应程序；可对反应程序进行设置，如可设置反应时间、可在反应过程中修改反应时间（缩短或延长）、可设置不同温度，每个温度档位差为0.1℃；可将反应程序保存为模板；可对不同孔进行重命名；可设置扫描间隔时间，范围为 18～60S，默认间隔为 60S；可设置阴阳性判断阈值；阈值线可上下拉动等 |
工作环境温度 | 18～35℃ |
储存温度 | -20℃～55℃ |
环境相对湿度 | ≤85% |
工作电压 | 100～240V，50～60Hz |
Ø 5 非洲猪瘟病毒荧光等温扩增检测试剂盒技术参数
作用与用途：用于血液、血球粉、淋巴结、脾脏、扁桃体以及猪肉产品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。
1.规格：48次/盒；
2.保存条件：-20℃保存；
3.组成：荧光等温扩增免提取反应液：1100ul；Bst DNA聚合酶：75ul；阴性对照：1000ul；阳性对照：200ul；矿物油：1000ul；说明书：1份；
4.有效期：12个月；
5.本试剂盒适用于便携式荧光定量PCR仪检测箱及各种其他型号荧光定量PCR仪；
6.反应体系：25ul；反应时间：1h；报告基团：FAM；淬灭基团：None；
7.结果判定：有明确判定标准，被检样品荧光信号有指数型增长，阳性对照Tt值≤45并出现典型的扩增曲线，阴性对照无Tt值并且无扩增曲线即S型扩增曲线，结果成立；被检样品Tt值≤45并出现典型的扩增曲线为阳性；被检样品无Tt值并且无典型扩增曲线为阴性；被检样品Tt值在45-60之间并出现典型的扩增曲线为可疑。对于可疑结果应重新检测，如果样品FAM通道仍有典型S型扩增曲线且Tt值≤60，则判定为阳性，否则为阴性；
8.本试剂盒经中国动物疫病预防控制中心评价，诊断敏感性100%，特异性100%；
9.该产品为疫控（诊）【2019】74号文件中推荐的产品；
10. 产品生产厂家具有分子生物学类诊断制品GMP车间。