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类胰岛素生长因子结合蛋白3测定试剂盒(酶联免疫吸附法)
【产品名称】
通用名称:类胰岛素生长因子结合蛋白3测定试剂盒(酶联免疫吸附法)
英文名称:IGFBP-3 ELISA
【产品规格】
96T
【预期用途】
试剂盒用于体外定量测定人血清中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的含量。
【前言简介】
胰岛素样生长因子(IGF)系统是正常体内生长和再生的主要调节因子,影响细胞增殖,分化和细胞凋亡。 此外,IGF-系统似乎改变胰岛素敏感性和长期性葡萄糖代谢。 许多流行病学,实验和临床资料表明,IGF-系统也涉及几种常见癌症的发展以及常见疾病如动脉粥样硬化和2型糖尿病等。
IGF家族由一系列密切相关的多肽组成,其包括两个主要促进生长的多肽,IGF-I和IGF-II,6种特异性高亲和力IGF结合蛋白(IGFBP-1至-6)和一个大的非IGF结合糖蛋白,“酸不稳定亚单位”(ALS)。
IGFBP-3是丰富的IGF结合蛋白,占健康人循环IGF结合能力的75%以上。 IGFBP-3与IGFBP-5共享功能特性,因为两种肽都能与ALS和IGF-I或-II的形成高分子量约150千道尔顿的三元复合物。 然而,IGFBP-5循环浓度比IGFBP-3低得多,而在健康受试者中,三元复合物携带多达90%的IGFBP-3但只有约50%的IGFBP-5。
IGFBP被认为是IGF-载体蛋白,稳定血浆IGF水平并控制IGF从循环中流出至血管外隔室。此外,人们认为 IGFBP复合IGF在生物学上或多或少无活性,被剥夺了与IGF-1受体相互作用的能力。但是,很快人们就发现,在一些实验设置中,IGFBP激活而不是抑制IGF-I介导的作用,因此,IGFBP通常被称为IGF-1生物活性的调节剂。另外,大多数的IGFBP,特别是IGFBP-3,发挥着IGF-I和IGF-I受体的独立作用,可能涉及位于细胞表面和细胞内的特定受体间的相互作用。例如,IGFBP-3现在被认为是作为抗癌分子服务的,它可以明显防止几种常见的癌症,同时IGFBP-3在培养的脂肪细胞中对胰岛素信号的传导作用也被提出。
三元复合物的转换非常缓慢,一天中IGFBP-3的血浆浓度始终保持稳定,而不受短期营养变化的影响。 因此,IGFBP-3的水平可以由一个单独测量确定。 GH是IGFBP-3以及IGF-I和ALS的主要调节因子,因此,三种多肽水平在青春期生长期间增加,其后随着年龄的增长逐渐下降。 在儿童中,IGFBP-3已显示与24小时GH分泌相关,因此,IGFBP-3可能对儿童GH缺陷的诊断有帮助。
【检测原理】
GFBP3-ELISA是固相酶扩增敏感性对微孔板进行的免疫测定。标准品和样品与包被的捕获单克隆抗体(MAb 1)和用辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体(MAb 2)反应。经过孵育形成一个三明治结构:包被的MAb 1 - -人IGFBP3--MAb 2-HRP,洗涤微孔板以除去未结合的酶标记抗体。通过显色测量结合的酶标记抗体反应。加入显色溶液(TMB)并孵育。添加终止液终止反应,然后在适当波长下读取微孔板。被测物含量的显色程度与人IGFBP3浓度成正比。绘制标准曲线,样品中IGFBP3浓度通过标准曲线可直接读取。
【试剂盒组成成分】
成分 | 规格(96T) | 状态 | |
PLATE | 96孔微量滴定板,包被了IGFBP3(单克隆抗体) | 96孔 | 即用型 |
AbHRP CONC | 酶标记物浓缩液:HRP标记的抗IGFBP3(单抗),含procin和牛血清白蛋白的柠檬酸缓冲液 | 0.5ml*1瓶 | 用酶标记物缓冲液20倍稀释 |
CONJ BUF | 酶标记物缓冲液:含有牛血清白蛋白和百里酚的tris缓冲液 | 10ml*1瓶 | 即用型 |
CAL N | 标准品-N=1-5,含牛血清和百里酚的磷酸盐缓冲液。 瓶体标签上有具体浓度。 标准品都是预稀释过的,用稀释液做0标准品。 | 5瓶冻干粉 | 加入1ml蒸馏水 |
DIL BUF | 稀释液:含有牛血清,牛白蛋白和百里酚的磷酸盐缓冲液 | 100ml*1瓶 | 即用型 |
CONTROL N | 质控品N=1或2 ,含有人血清和百里酚,质控品是预稀释过的 | 2瓶冻干粉 | 加入1ml蒸馏水 |
WASH SOLN CONC | 洗涤液(tris-HCL) | 10ml*1瓶 | 蒸馏水200倍稀 释(使用电磁搅拌器) |
CHROM TMB | 底物液:TMB | 12ml*1瓶 | 即用型 |
STOP SOLN | 终止液:1.0N盐酸 | 12ml*1瓶 | 即用型 |
注意:
用稀释液做0标准品。
校准品是针对NIBSC / WHO重组的IGFBP-3的标准化物质,参考试剂编号93/560。
所需材料(未提供)
高质量的蒸馏水
50ul,100ul,1ml的微量移液器(推荐使用一次性塑料枪头的移液器)
稀释样品的塑料管
旋涡搅拌器
磁力搅拌器
酶标仪(450或者650nm)
洗板机