多巴胺试剂盒（生物胺类）

（德国IBL：货号：RE59161）

通用名称：多巴胺ELISA试剂盒

英文名称：dopamineELISA

产品规格：96T

多巴胺试剂盒（生物胺类）预期用途：

可用于人血浆和尿液中多巴胺的体外定量检测，可手动操作，也可自动操作。进一步的研究表明：此试剂盒还可用于组织匀浆和细胞培养上清液的研究。

前言简介：

儿茶酚胺类激素肾上xian素、去甲肾上xian素和多巴胺主要由肾上腺髓质、交感神经系统和大脑产生。它们几乎影响所有的组织，并与其它激素和神经系统一起参与各种生理过程的调节。在许多疾病中，儿茶酚胺激素及其代谢产物间甲肾上xian素和去甲变肾上xian素的分泌量都会增加，因而这些激素可用于疾病的诊断。所以，这些激素的检测对于疾病的诊断及神经系统肿瘤疾病的具有重要意义。它主要用于嗜铬细胞瘤的诊断，当然也用于成神经细胞瘤和神经节细胞瘤的诊断。因为在实验一开始时有提取步骤，所以用户可使用所有动物材料进行实验。此试剂盒可检测大鼠、小鼠或其它动物，所有动物的儿茶酚胺的化学结构相同。

检测原理：

利用的是ELISA的夹心法。微孔中包被了羊抗兔抗体。在温育时间之内，加入的抗体可直接与抗原分子上的一个表位结合。样品中的抗原与酶标二抗（可与抗原分子上的不同表位结合）在包被孔中温育。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成正比。样品的结果可直接用标准曲线确定。

贮存与稳定性：

运输环境和储存环境温度为2-8℃，避免热源或太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂的准备将在相关章节中阐述。开封的试剂盒在有效期内稳定，前提是要将试剂盒用袋子密封并储存于2-8℃的环境下。

实验所需器材（但试剂盒不提供）：

1、移液器（10；10-100；100-1000μL）

2、轨道摇床（200-900rpm）

3、旋涡混合器

4、带储器的8通道移液器

5、洗涤瓶，自动或半自动包被板清洗系统

6、酶标仪，405nm(参考波长：620-650nm)

7、双蒸水或去离子水

8、吸水纸，取样吸头，计时器

9、样品稀释用试管

检测步骤：

1、在一次性试管内，用释放缓冲液以1:51的比例稀释提取的标准品，质控品和尿液样本（如：10ul提取样本+500ul的释放缓冲液）

2、在包被板的每一微孔中加入75μL刚配置好的COMT酶溶液，轻轻振荡。

3、将预稀释的标准品，质控品和尿液样本加100ul至相应孔内血浆样本直接加100ul于相应孔内在此步骤中，将枪头直接触碰COMT酶溶液，颜色会转为粉红色，轻轻混匀。

4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。

5、盖板。在振荡器（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育120min

6、弃去孔内反应液，每孔用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。

7、每孔加入100μL酶联物

8、盖板。在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育60min

9、弃去孔内反应液，用250-300μL已稀释好的洗涤液洗板6次。

10、加底物液和终止液时，其时间间隔应相同

11、每孔加入200μL底物液

12、在轨道摇床（400-600rpm）上18-25℃的环境下温育40min。如果自动操作时的温度超过25℃时，则应相应的将温育时间缩短至30min。

13、每孔加入50μLPNPP终止液以终止底物反应，轻轻振荡包被板以充分混合试剂成分。

14、加终止液后60min之内405nm处读取OD值。（参考波长：620-650nm）

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