细胞凋亡检测试剂盒Cell counting KIT-8 （CCK-8）日本原装

保存 ：4℃密封避光保存，有效期一年。

产品简介 ：
    Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学名： 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐） 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验

使用说明 ：
一 、 制作标准曲线 （ 测定细胞具体数量时）
    1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
    2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。
    3、接种后培养细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴） ，OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要*，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间。 ）
二 、 细胞活性检测
    1、在 96 孔板中接种细胞悬液（100µL/孔） 。将培养板放在培养箱中预培养（在 37℃,5% CO 2 的条件下） 。
    2、向每孔加入 10µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。
    3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
    4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。
    5、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
三 、 细胞增值- 毒性检测
    1、 在 96 孔板中配置 100 µL 的细胞悬液。 将培养板在培养箱预培养 24 小时 （在 37 ℃， 5% CO2 的条件下） 。
    2、 向培养板加入 10µL 不同浓度的待测物质。 在培养箱孵育一段适当的时间 （例如： 6、 12、 24 或 48 小时） 。
    3、向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数） 。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基） ，去掉药物影响。
    4、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
    5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
    6、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：.
    细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0 加药)－A(空白)]×100
    A（加药） ：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度
    A（空白） ：具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度
    A（0 加药） ：具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
    细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项 ：
    ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK-8 试剂后的培养时间。
    ②白细胞可能需要培养较长时间。
    ③当使用标准 96 孔板时，贴壁细胞的小接种量少为 1 ,000 个/孔 (100 µL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 ( 100 µL 培养基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK-8 溶液。
    ④如果没有 450nm 的滤光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片，但是 450nm 检测灵敏度高。
    ⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

CCK-8法与其它检测法之间的比较

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