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Calcein-AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂,发绿色荧光(Ex=490nm, Em=515nm)。因其在传统的 Calcein(钙黄绿素)基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,增加了疏水性,使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后,Calcein-AM(本身不发荧光)被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子 Calcein,从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂(如 BCECF-AM 和 CFDA)相比,由于 Calcein, AM 细胞毒性极低,是用于活细胞染色的荧光探针,而且不会抑制任何的细胞功能,如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶,Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此,Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用,同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿过活细胞的细胞膜,仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光(Ex=535 nm, Em=617 nm),因此PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用 545 nm 激发,仅可观察到死细胞。
本试剂盒的工作原理就在于 Calcein-AM 和 PI 的双重染料,来进行活细胞和死细胞的双重染色标记,从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系,单次就 200µl 细胞悬液进行染色,可以做 500 次检测
相关文献:
《Apatite nanoparticles mediate intracellular delivery of trehalose and increase survival of cryopreserved cells》 作者:Bin Wang,Gaoli Liu,Vasudevan Balamurugan,Yulong Sui,Guannan Wang,Yisheng Song,Qing Chang 期刊:Cryobiology 影响因子:2.141 PMID:30458174
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒