酶底物原理检测大肠菌群、粪大肠菌群，大肠埃希氏简介
时间：2024-04-30 阅读：697
●GB 4789.28《 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂质量控制》要求验证每一批培养基，确保所接收的每批培养基满足质量要求；
●EPA《饮用水检测实验室认证手册》第五版(2005年1月)中对质量控制的要求：每一批培养基以及实验室自制的培养基在使用前都应该采用阳性和阴性菌株进行无菌性检验。
产品特点
适用性广/可靠度高
参照GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》和 HJ1001-2018《 水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》中酶底物法检测培养基的要求，环凯生物自主研发了酶底物法专用的MMO-MUG培养基，通过100株包含大肠菌群、大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群(包括从水样分离的菌株和标准菌株)的验证，结果显示培养基特异性高，阳性菌株特征明显，无假阴性情况。灵敏度高，可精确检出低至 1MPN/100mL 水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群活菌，而对水样中常见包括酶底物假阳性菌株在内的非大 肠菌群抑制明显。产品通过了生活饮用水、地表水、地下水、生活污水和工业废水在内超200份样品的测试。
为了满足客户的方法验证、培养基适用性验证、阳性对照和 定量检测等需求，环凯生物推出可溯源的质控样。产品结果显示底物或荧光底物特异性高，通过抑菌剂抑制其他异养菌，可准确检测出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪(耐热)大肠菌群活菌。通过颜色或荧光判读结果，阴阳性区分明显。
操作简单/检验周期短
只需4步即可完成检测，平均每分钟可检测一份样品。
检验周期只需24小时，无需验证试验。
检测原理
总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌能产生β-半乳糖苷酶，使培养基中的无色底物邻硝基苯β-D-吡喃半乳甘糖分解黄色的邻硝基苯酚，其中大肠埃希氏菌还能同时产生β-葡萄糖醛酸酶，使培养基中的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸酶 分解为-甲基伞形酮，在紫外灯照射下产生荧光。在36±1℃经 培养后培养孔变黄的为总大肠菌群；培养孔变黄并伴有荧光的为大肠埃希氏菌；44.5℃培养后培养孔变黄的为粪大肠菌群，变黄并有荧光的为大肠埃希氏菌。统计阳性反应出现的数量，对照MPN图表，分别计算出总大肠菌群，粪大肠菌群，大肠埃希氏菌的浓度值。
——水中大肠菌群检测酶底物法产品系列(含质控包)技术参数
产品
货号
技术参数
Minimal medium
ONPG-MUG
培养基
DW001
●100袋/盒
●封装包装
●辐照灭菌
97孔定量盘
DW-DLP-97
●环氧乙烷灭菌
●97孔定量盘无需稀释可检测≤2419
MPN/100mL总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群
51孔定量盘
DW-DLP-51
●环氧乙烷灭菌
●51孔定量盘无需稀释可检测≤200
MPN/100mL总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群
97孔标准阳性比色盘
DW-YXP-97
●装有黄色及荧光比色物，用于辅助判读阳性结果
●环氧乙烷灭菌
51孔标准阳性比色盘
DW-YXP-51
●装有黄色及荧光比色物，用于辅助判读阳性结果
●环氧乙烷灭菌
取样瓶
DW-QYP-10
●20瓶/盒,5盒一箱
●每瓶含10mg 硫代硫酸钠
●辐照灭菌
水质酶底物法
检测质控样品
QSM006
可溯源的质控样
●含大肠埃希氏菌，肺炎克雷伯氏菌，铜绿假单胞菌
酶底物定量盘程控封口机Elte Sealer-1
778860728
●尺寸420mm长x320 mm宽x360mm 高
●重量约12kg
●封口速度12秒每片
● 预热时间<4min
● 通过ISO 认证
●带计数功能的程控系统
●能连续封口定量盘，不间断，提供工作效率
●硅胶托根据环凯生物定量盘设计，使定量盘封口平整
● 噪音<48dB(A)
● 外罩温度<40℃
●工作电压AC110V~ 220V
●工作环境温度-10℃~ 50℃
酶底物定量盘暗箱式三用紫外分析仪
UV Analyzer-1
778860729
●光源打开方式：手动按钮
●光源：长寿命LED 光源、365nm 和254nm 波长紫外灯
●材质：金属
●外形尺寸：320×320×260 mm
● 电源：AC220V
●重量：3kg
●工作电压AC110V~
220V
●工作环境温度
10℃~50℃
——适用于自来水系统、疾病预防控制中心、进出口检验检疫 系统、第三方检测实验室
符合GB/T5750-2023《生活饮用水标准检验方法》酶底物法(MMO-MUG)培养基
步骤1-混合
将MMO-MUG培养基加入到 100mL 水样中，混合均匀。
步骤2-定量
倒入97孔定量盘，无需稀释定量范围：1-200MPN/100 mL 总大肠菌群和大肠埃希氏菌。
步骤3-封口培养
在程控定量封口机上封口后，36±1℃培养24小时。
步骤4-结果读取
无色：阴性；
仅变黄：总大肠菌群阳性；
变黄且发荧光：大肠埃希氏菌阳性；对照MPN 表计数定量。
质量控制体系（质控样）
请在专业技术人员指导下完成
意义
● 符合GB27043-2012 合格评定能力验证的通用要求，符合CNAS-CL01-A001-2022 对微生物实验室的要求；
● 用于识别培养基、设备、方法是否准确及评估操作人员的能力和确认其资格；
● 检测测量方法的有效性。
操作步骤
准备1个空的无菌瓶(>300 mL) 和300mL 稀释液(无菌水或无菌PBS 缓冲液)。
将质控样冻干粉从冰箱中取出，置于室温10~15分钟平衡温度。
打开质控冻干粉，加入稀释液3mL溶解冻干粉，待充分溶解后全部转移到无菌瓶中。
加少量的稀释液冲洗冻干粉瓶，回收所有质控样菌悬液到无菌瓶中，将剩余的稀释液倒入，充分振荡确保均匀，总体积为300mL。
每个质控样冻干粉的量可做3个平行实验，将质控样悬液倒入取样瓶，每瓶定容到100mL 刻度。
将MMO-MUG 培养基倒入每个含质控样取样瓶中，混匀。将所有混合液倒入97孔定量盘中并封膜，在36士1C培养24小时。
判读：黄色孔格为总大肠菌群阳性，黄色且显荧光为大肠埃希氏菌阳性，对照MPN表定量计数。
酶底物法检测配置单一饮用水检测
产品 | 货号 | 技术参数 |
Minimal medium ONPG-MUG培养基 | DW001 | 100袋/盒 |
97孔定量盘 | DW-DLP-97 | 用于检测≤2419MPN/100ML 总大肠菌群和大肠埃希氏菌 或粪大肠菌群 |
51孔定量盘 | DW-DLP-51 | 用于检测≤200MPN/100ML总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群 |
97孔定量盘 | DW-YXP-97 | 用于辅助判读阳性结果 |
51孔定量盘 | DW-YXP-51 | 用于辅助判读阳性结果 |
水质酶底物法 检测质控样品 | QSM006 | 用于质酶底物法检测质控 |
酶底物定量盘程控封口机 Elte Sealer-1 | 778860728 | 配合定量盘使用， 用于定量检测大肠菌群 |
酶底物定量盘暗箱式三用 紫外分析仪UVAnaly zer-1 | 778860729 | 用于避免紫外线辐射 |