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大肠杆菌大肠菌群测试片原理及适用范围
大肠杆菌(Escherichia coli)和大肠菌群(Coliform)都是存在于温血动物肠道和粪便的细菌,是条件性致病菌,主要造成水体污染,也可能引起食物中毒的发生。大肠杆菌大肠菌群测试片(FilmplateTM E.coli&coliform count plate BE203)是一种预先制备好的一次性培养基产品,可以同时检测大肠杆菌和大肠菌群,含有大肠菌选择性培养基、冷水可溶性的吸水凝胶和半乳糖苷酶(GAL)和葡萄糖醛酸酶(GUD)指示剂。大肠杆菌显蓝色,其他大肠菌群显红色,蓝点加上红点为总的大肠菌群数。 本产品适合于食品及原料中大肠菌群的计数,如消毒牛乳、冷饮和调味品等样品的检测,也可用于表面的卫生检测。 执行标准:食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数——PetrifilmTM 测试片法(GB/T 4789.38—2008)。
2、操作方法
2.1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液,用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇后成为1:100的样品匀液,依次往下稀释。
2.2、接种:一般食品选1~2个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如饮用纯水和矿泉水等)可直接吸取原液进行检测。将置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右使培养基凝固,每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3、结果判读
培养后大肠杆菌显蓝色,其他大肠菌群显红色,蓝点加上红点为总大肠菌群数。
4、计数原则及报告方式
4.1、选择菌落数在15~150个之间的纸片进行计数。
4.2、若两个稀释度的菌落数均在15~150之间,则取其平均菌落数乘以稀释倍数,即为每毫升(或每克)样品中的大肠菌群菌落形成单位数;
4.3、如果所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15,则计数稀释度zui低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之;如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长,则以小于1乘以zui低稀释倍数报告之;
4.4、如果所有稀释度的菌落数都大于150,计数zui高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。计数菌落数大于150的测试片时,也可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数,换算成单个方格内的菌落数后乘以20(滤纸区面积为20cm2),即为测试片上估算的菌落数。报告单位以CFU/mL(或CFU/g)表示。
5、附加说明
5.1、样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时用1mol/L氢氧化钠(NaOH)或1mol/L盐酸(HCl)调节pH。
5.2、我国的食品卫生标准大多都以大肠菌群(Coliform)作为检测指标,而欧盟等许多国家则以大肠杆菌(E.coli)作为检测对象,因此,本产品对于出口食品和航空配餐等企业具有更广泛的应用前景。
6、保存条件
本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,在拆封前将整包回温至室温。