【样本要求】

1.样本类型和采集

血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置0.5-2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于仅供科研使用，不得用于临床诊断。-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。细胞裂解液: 吸弃培养液，用 PBS（0.01 M，pH 7.4）将细胞洗一遍。用细胞刮刮下细胞（不能用胰酶和 EDTA 处理），加入 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。悬浮细胞可省略。收集细胞悬液，4℃1000×g 离心 10min，弃去培养基，用预冷的 PBS 润洗 3 次。加入适量的预冷 PBS 或非变性细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞,通常 6 孔板一个孔的细胞量需要 150-250μL PBS 重悬。 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融 3 次，使细胞充分裂解,也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。4℃ 10000×g 离心 10min，除去细胞碎片，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。.样本保存和稳定性样本在 2-8℃条件下，可以储存 72h，在- 20℃或-80℃可以储存6 个月及以上。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融