人表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水 平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体， 往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与 HRP 标记的 表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经 过che底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生 长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。

标本要求
1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查
（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相
关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，
可将标本放于-20℃保存，备查
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒操作步骤
1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、
待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
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7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。

规格：
96 份/盒

保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月