EA01C\\00                     2018-01版

猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒

英文名称：Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test

【规格】

96T×2/盒

【用途】

用于检测血清中猪瘟病毒抗体，适用于对猪场猪瘟疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。

【检验原理】

本试剂盒是用来检测猪血清中猪瘟病毒抗体的试剂盒。该试剂盒是用猪瘟病毒抗原包被的微量反应板，利用阻断ELISA原理来检测猪血清中猪瘟病毒抗体。用酶标仪在双波长(450nm，630nm)测定该反应体系的吸光度。当被测样品中含有猪瘟病毒抗体(阳性结果)时，显色就会变浅，当被测样品中不含有抗猪瘟病毒抗体(阴性结果)时，颜色就会变深。样本的阻断率可以通过与阴性对照吸光度的比值来确定。

【主要组成成份】

【自备器材】

1．酶标仪：双波长450/630nm滤光片

2．精确的微量移液器（单道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒温箱

4．微量振荡器

5．洗液吸移装置

6．一次性枪头（10ul，200ul）

7．去离子水

【样本要求】

本试剂检测的样本为猪血清或血浆，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存应不超过一周，长期应在-20℃以下保存。

【实验准备】

1．试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30min，可以获得jia结果。

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本和阴性阳性对照血清作2倍稀释（即：60μl血清加60μl样本稀释液），混合均匀。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释20倍（即1ml浓缩洗涤液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使结晶*溶解。

【检验方法】

1．加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入稀释好的阴性、阳性对照血清100μl于相应孔中。其余为样本孔，每孔加100μl用样本稀释液稀释好的样本（可做单孔也可双孔检验）。

2．温育：加样后，盖上盖板膜，置37℃温育120分钟。

3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10秒，直接甩出，洗涤3次，后一次洗涤后在吸水纸上拍干板内液体。

4．加酶：每孔加酶标记物100μl。

5. 温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37℃温育30分钟。

6．洗板：同步骤3。

7．显色：每孔加显色剂100μl，振荡混匀，37℃避光反应10分钟。

8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10秒，充分混匀，终止后即读数。

9．读数：以450nm/ 630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔OD值，试验成立条件是阴性对照OD值大于1.0，阳性对照的阻断率均大于50％，若试验不成立，有可能是操作失误造成，应重读说明书，再操作一次。

S=样品孔OD值，N=阴性对照孔平均OD值

阻断率=(1–S/N)×100%

若被检样品的阻断率小于或等于30%，该样品判为CSFV阴性。

若被检样品的阻断率大于或等于40%，该样品判为CSFV阳性。

若被检样品的阻断率在30%~40%之间，该样品判为可疑。

【注意事项】

1．本试剂盒仅供研究使用。

2．不要使用过期的试剂盒组分，不要把不同批次的组分混合使用。

3．使用试剂盒之前，一定要仔细阅读说明书。

4 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（20～25℃），并摇动使沉淀溶解（hao在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用去离子水作20倍稀释（例如：50ml的浓缩洗涤液加上950ml蒸馏水），混匀，稀释好的洗涤液在2～8℃可以存放7-10日。

5．本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

6．微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光保存。

7．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

8．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

9．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

【储存条件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期12个月。

【生产日期及批号】

详见包装袋和外包装盒。

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