黄曲霉素试剂盒详细说明

黄曲霉素试剂盒详细说明

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2018-05-18 11:25:01
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上海研谨生物科技有限公司

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产品简介

黄曲霉素(Aflatoxin)ELISA试剂盒--价格合适,质量可靠。咨询! 【质量承诺】: 非人为造成的产品质量问题,视具体情况,我司负责退货换货。

详细介绍

黄曲霉素(AFT)酶联免疫分析(ELISA

              试剂盒使用说明书

 

 

本试剂盒仅供研究使用。 

 声明:应国家相关部门关于违禁字的规定本文中黄曲霉中的毒以堵替代

 

1 使用目的:

 

本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织(如鸡、牛肉和猪肉),鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中总黄曲霉堵素(AFT)残留的定量检测。

 

2 实验原理

 

本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法,在微孔板包被有黄曲霉素偶联抗原,加入黄曲霉(AFT)标准品或样品,游离黄曲霉(AFT)与微孔条上预包被的黄曲霉(AFT)偶联抗原互相竞争抗黄曲霉(AFT)抗体酶标记物,用 TMB 底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在 450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中黄曲霉(AFT)含量成反比,通过标准曲线计算样品中黄曲霉(AFT)的含量。

 

3 试剂盒组成

 

 

AFT 抗体酶结合物:1 瓶(3ml)。

显色液 A1 瓶(3ml)。

显色液 B1 瓶(3ml)。

终止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸。

样本稀释液:1 瓶(10×,  3ml),用于样品稀释用。

浓缩洗涤液:1 瓶(20×20ml),用于洗板。

说明书一份。

 

4 需要而未提供的材料

4.1 设备

4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相当的滤纸。

4.1.7微量移液器。

4.2 试剂

4.2.1去离子水或蒸馏水。

4.2.2 甲醇。

5 贮存

试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻

未用完的微孔板应该密封干燥保存

6 注意事项

使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

不要使用过期试剂盒。

试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

标准品中含有黄曲霉素,使用时应特别注意,操作时应带手套。

终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。

不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。

稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果

混合试剂时应避免起泡。

 

7 工作液准备

 

8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

8.110g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2强力振荡3分钟

8.3Whatman 滤纸过滤

8.425µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2

9 酶免分析步骤

9.1 实验须知

9.2 分析步骤

9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液

体。

9.4 反应

10.1定量分析

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值

10.1.2以黄曲霉素B1浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为AFT浓度的对数值,求得反对数即为测定液中AFT浓度Cng/ml

10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

10.2 半定量测定

10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

物质 交叉反应黄曲霉素B1 100% 黄曲霉素B2 80% 黄曲霉素G1 75% 黄曲霉素G2 30%

12 试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0.1ppb B0吸光度*值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。

13试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ng/ml~8.1ng/ml

14 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLCGC/MS加以确证。

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