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产品分类：PCR相关

储存条件：—20℃,12个月

用途：专用于染料法（SYBR GreenⅠ）实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料、Mg 2+ 和校正染料ROX，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。

注意事项：含有的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针；

含有的GoldStarᲂ

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

植物乳杆菌植物亚种磷化中心粒蛋白Nudel抗体Human TLR2(Toll-like receptor 2) ELISA Kit基质金属蛋白5(MMP-5)

吸水链霉菌磷化中心粒蛋白Nudel抗体Human TLR3(Toll-like receptor 3) ELISA Kit基质金属蛋白4(MMP-4)

pMV306hsp+LuxG13（addgene26161）线粒体复合物NDUFS4蛋白抗体Human TNFβ(Tumor Necrosis Factor Beta) ELISA Kit基质金属蛋白3/基质裂解1(MMP3/STR1)

豌豆根瘤菌NADH脱氢α家族8抗体Human VEGFR2/KDR(Vascular endothelial growth factor receptor 2) ELISA Kit基质金属蛋白3(MMP-3)

枯草芽孢杆菌NADH脱氢黄蛋白1抗体Human TNFRSF11A/RANK(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A) ELISA Kit基质金属蛋白25(MMP25)

立枯丝核菌NADH脱氢黄蛋白2抗体Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit基质金属蛋白2/明胶A(MMP-2/Gelatinase A)

多主葡萄壳菌NADH氧化还原辅1抗体Human TNFRSF9/4-1BB(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9) ELISA Kit基质金属蛋白2(MMP-2)

食鹿角菜假交替单胞菌膜内在蛋白NOD26抗体Human TNFSF13/APRIL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13) ELISA Kit基质金属蛋白1原(Pro-MMP-1)

番茄枯萎病菌磷化谷受体2B抗体Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit基质金属蛋白14(MMP-14)

胶冻样类芽孢杆菌磷化谷受体2A+2B抗体Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit基质金属蛋白13(MMP-13)

顶孢霉高度相似的周期蛋白激NEK6抗体Human TNFSF11/RANKL(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11) ELISA Kit基质金属蛋白12(MMP-12)

枯草芽孢杆菌A型流感病-NS1抗体（神经1）Human TNFSF4/OX40L(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4) ELISA Kit基质金属蛋白11(MMP11)

高山被孢霉去甲肾上腺转运蛋白/神经递质去甲肾上腺转运体抗体Human TNFSF14/LIGHT(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 14) ELISA Kit基质金属蛋白10(MMP-10)

构巢曲霉磷化一氧化氮合成3（内皮型）抗体Human TNFSF18(Tumor necrosis factor ligand superfamily member 18) ELISA Kit基质金属蛋白1(MMP-1)

草生毛霉新的饱食分子蛋白抗体Human TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit基质γ羧基谷蛋白(MGP)

小孢根霉须状变种脊髓灰质炎病受体相关蛋白4抗体Human TGFβ1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit基膜聚糖/内腔蛋白(LUM)

炭疽芽胞杆菌Bacillus│anthracis 质量规格：HPLC>99%,标准品丹参IIA

蛇孢霉属Polyscytalum│sp. 质量规格：>98%,BR丹B

灰藤黄链霉菌Streptomyces│griseoluteus 质量规格：>98%,BR丹A
Real-time PCR MixtureSAA(Mouse Serum amyloid A)ELISA Kit  小鼠血清淀粉样蛋白A规格： 48T

ACA(Mouse centrol and centrosome antibody)ELISA Kit  小鼠抗中性粒/中心体规格： 48T

Hpt/HP(Mouse Haptoglobin)ELISA Kit  小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白规格： 48T

16- Alpha OHE-1(Mouse 16- AlphaHydroxyestrogen 1)ELISA Kit  Hpt/HP小鼠16α羟基雌tong1规格： 48T

Alpha1-AGP(Mouse Alpha1-Acid glycoprotein)ELISA Kit  小鼠α1suan性糖蛋白规格： 48T

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。