Thermo Pierce 89983，SILAC Protein Quantitation Kit–DMEM

产品名称：SILAC蛋白定量试剂盒

品牌：Thermo Pierce

货号：89983

组分：货号：1860972 （SILAC Protein Quantitation Kit） +货号：89986( Dialyzed FBS for SILAC,50ML )

储存温度：1860972 4°C，89986 -20°C

SILAC蛋白定量试剂盒及试剂 用途介绍：

对于差异蛋白表达进行定量分析。

在细胞培养中使用氨基酸进行稳定的同位素标记（SILAC）是鉴定和定量复杂蛋白样品中相关差异的变化的一种有效的方法。SILAC方法通过体内代谢将“重的”13C-或15N标记的氨基酸整合到蛋白中然后进行质谱（MS）分析以便加快对蛋白的测定、鉴定、定量和理解。

应用：

?  可以使用专门针对干细胞的试剂盒对干细胞分化中的蛋白进行鉴定。

?  可以对不同细胞处理后的蛋白丰度的相关变化进行定量的分析。

?  可以对没有抗体的蛋白进行定量分析。

?  正常细胞vs.疾病细胞的蛋白表达谱的绘制。

?  可以在一个实验中对成千上万的蛋白进行鉴定和定量。

 产品特点：

标记物能够100%的整合到活细胞的蛋白中。

? 可重复 – 降低由于样品制备不同而造成的实验内差异。

? 灵活 – 培养基中缺乏L-赖氨酸和L-精氨酸两种氨基酸，因此可以通过两种氨基酸的同位素标记更加*的覆盖整个蛋白质组。

? 通用 – 可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的哺乳动物细胞中表达的蛋白进行标记，这些细胞包括HeLa，293T，COS7，U2OS，A549，A431，HepG2，NIH 3T3，Jurkat及其它。

? 兼容– 可以通过分化培养基测定人间质干细胞或小鼠胚胎干细胞中调节发育的重要蛋白。

 SILAC需要在含有轻或重的必需氨基酸的培养基中培养哺乳动物细胞；例如，分别含有12C6及13C6 L-赖氨酸。常规的实验包括在含有轻氨基酸（对照）的培养基中培养一批细胞，同时在含有重氨基酸（实验组）的培养基中培养相同的另一批细胞。轻、重氨基酸通过自然的细胞内蛋白合成的过程整合到蛋白中。在对一个样品进行化学处理或者遗传操作使其蛋白质组发生变化之后，将从两种细胞中得到的蛋白等量的混合在一起，然后利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离并利用胰酶进行消化然后进行MS分析。由于标记有重和轻氨基酸的多肽在化学性质上是*相同的，因此这两种多肽在反相柱洗脱时是同时洗脱的，因此能够在MS分析中同时检测到两种多肽。然后就可以利用来自于每种蛋白的同位素标记的多肽的相

对峰强度来确定处理后的样品的蛋白丰度的变化。（见下图）我们提供几种不同的Thermo Scientific Pierce SILAC试剂盒，还提供能够支持不同类型的哺乳动物细胞系生长的培养基，这些细胞系甚至包括人间质干细胞和小鼠胚胎干细胞。每个试剂盒都包括同位素标记细胞所需的所有试剂，这些试剂包括培养基、重和轻氨基酸对以及透析过的血清。几种同位素标记的赖氨酸和精氨酸都是单独提供的，因此可以进行多重实验和分析。当与Thermo Scientific蛋白/多肽样品富集产品结合使用时，可以使用Pierce SILAC蛋白定量试剂盒对低丰度蛋白进行MS分析，这些低丰度蛋白包括细胞表面蛋白、细胞器特异性蛋白以及磷酸化蛋白或糖蛋白这些经过翻译后修饰的蛋白。

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