从组织中获取DNA难吗？不难，真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课，很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA，尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织，后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建,还是有一定的难度的。
 

zui近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难，因为老师要做桃的个体重测序，因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其他很多老师交流植物DNA的提取，大多数目前仍然使用CTAB法，有些老师购买试剂盒进行提取，其实很多植物DNA提取试剂盒成分也是CTAB。CTAB法是提取植物DNA非常经典方法，但在提取的过程中由于要在65℃水浴中放置1个小时，因此耗时较长。我们在使用该法提取桃DNA时，获得DNA中含有大量的蛋白和多糖，虽然通过多次的苯酚氯仿抽提可以大部分去除，但DNA得率较低。在这里给大家分享一种快速获取植物高质量DNA的方法，供大家在提取植物DNA时作为参考，用该法提取的植物DNA*后续酶切、BAC文库构建、高通量测序大片段文库构建，将该法称之为月桂酸钠法。
 

月桂酸钠抽提缓冲液：

Tris-Hcl（pH8.0）100mmol/L；NaCl 100mmol/L；EDTA（pH8.0）20mmol/L；月桂酸钠 1%；
 

配法：准确称取NaCl 5.844g，月桂酸钠 10g置于1000mL烧杯中，加入100ml Tris-Hcl（1M）以及40mLEDTA（0.5M）、800mlddH2O，用盐酸调节pH至8.0，定容至1000 mL，灭菌后室温保存。
 

月桂酸钠英文名称：sodium lauroyl sarcosine  分子式：C15H28NaO3N，分子量：293.39。
 

以该法大量获取玉米叶片DNA为例的实验流程：

（1）选取适量的玉米幼苗新鲜叶片，以纱布捆扎，做好标记，置于液氮中保存；

（2）研钵以液氮预冷，将玉米叶片置于研钵中，倒入液氮，迅速研磨至粉末级，期间时时加入液氮，防止研磨过程中DNA被降解；

（3）将研磨好的粉末移入灭菌后的50mL抽提试管中，用移液管加入10mL月桂酸钠抽提缓冲液，反复缓慢的摇匀；

（4）用移液管向50mL抽提试管中加入等体积（10mL）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），反复缓慢的摇匀；

（5）12000 rpm，4°C离心20min后取出，小心吸取上清液16mL于新灭菌的50ml抽提试管中；

（6）向上述抽提试管中加入12mL异丙醇，上下缓慢颠倒数次，有白色絮状沉淀析出，颠倒时注意往一个方向，防止沉淀散开，不利于后续实验；

（7）将白色絮状沉淀用枪头从抽提试管中轻轻挑出，至于2mL EP管中；

（8）向上述2mL EP管中加入1.8mL70%乙醇，反复轻轻震荡洗涤，4°C，12000 rpm，高速离心15min，弃上清，重复此步骤两次；

（9）将得到的白色沉淀再次4°C，12000 rpm短暂离心数秒，以移液器吸干残留乙醇；

（10）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，这个过程中要经常拿出观察，防止过度烘干，不利于后面溶解；

（11）待白色沉淀变透明后，向2mLEP管中加入0.9mLTE缓冲液（pH8.0），放置于65℃恒温箱中，期间轻微弹匀，使DNA充分溶解；

（12）DNA*溶解后，加入5μL RNase（0.1mg/mL），置于37°C干燥箱中30min，消化RNA，取出3μL，以1%琼脂糖胶检测是否有RNA残留；

（13）待RNA消化完成后，向EP管中加入等体积（0.9mL）氯仿，轻轻摇匀；

（14）4°C，12000 rpm高速离心15min；

（15）吸取0.7mL上清置于1.5ml新EP管中，加入1/10体积（约0.07mL）NaAc（3M/L）溶液，轻轻摇匀；

（16）向上述EP管中加入等体积（0.7mL）异丙醇，轻轻摇匀后，于-20°C静置20min；

（17）4°C，12000 rpm高速离心15min，弃上清；

（18）将得到的白色沉淀以70%乙醇洗涤两次，去除残留的乙醇；

（19）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，该过程中要经常拿出观察，防止烘干过度，不利于后面溶解；

（20）待白色沉淀变透明，管中无残留的乙醇味后，加入200μL TE（pH8.0），于37°C干燥箱中溶解；

（21）待DNA*溶解后，取出1μL，以分光光度计测定OD值，分装后于保存（-20°C）。

以该法获取的玉米叶片DNA电泳图如下：



DNA提取过程中常见问题及建议解决方案：



来源：http://blog.sciencenet.cn/blog-657244-721856.html