干货 | DNA电泳优化宝典，让条带清晰可见！
时间：2024-10-15 阅读：163
核酸电泳是分子生物学研究中的一项基本技术，广泛应用于基因克隆、DNA指纹分析、RNA表达研究等领域。这项技术的核心在于利用电场驱动DNA或RNA分子通过凝胶基质，实现不同大小分子的分离。尽管核酸电泳的原理相对简单，但其往往影响最终的成果展示。所以在实际操作过程中，如何提高电泳效率、获得更清晰的条带一直是研究人员追求的目标。小翌将分享一些实用的实验室小窍门，以帮助各位科研小伙伴们提高电泳效率~
电泳槽
选择合适的凝胶浓度和电泳缓冲液
凝胶浓度对电泳分离效率有着直接影响。琼脂糖是常用的凝胶材料，其浓度通常在0.7%至2%之间选择。浓度越高，凝胶的分子孔径越小，DNA迁移速率越慢，但分辨率越高。反之，浓度越低，DNA迁移速率越快，但分辨率较低。电泳缓冲液的组成对DNA的迁移速度和分离效率同样重要。因此，针对实验目的不同，选择合适的凝胶浓度与适配的电泳缓冲液。
琼脂糖浓度 | 有效分离范围（bp） | 推荐缓冲液 |
0.5% | 2,000-50,000 | 1×TAE |
0.8% | 800-10,000 | 1×TAE |
1.0% | 400-8,000 | 1×TAE |
1.2% | 300-7,000 | 1×TAE |
1.5% | 200-3,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
2.0% | 100-2,000 | 1×TAE/0.5×TBE |
3.0% | 25-1,000 | 0.5×TBE |
TAE缓冲液
TAE缓冲液含有乙酸（Acetic acid）、EDTA和Tris，适合用于快速电泳和大片段DNA的分离。乙酸的存在降低了凝胶的pH值，有助于提高电泳速度。
TBE缓冲液
TBE缓冲液含有硼酸（Boric acid）、EDTA和Tris，其离子强度较高，适合用于小片段DNA的高分辨率分离。硼酸根离子的存在增强了凝胶的稳定性，有助于提高分离效率。因此凝胶浓度越大，需采用TEB缓冲液，便于分离条带。
小翌有多种琼脂糖，适合不同的应用场景，供大家选择~
样品准备
DNA纯化
确保DNA样品的纯度，避免蛋白质、多糖和其它杂质的污染，这可以通过适当的纯化步骤实现。纯化的DNA样品能够提供清晰的电泳条带，减少背景干扰。
DNA Marker
选择背景干净、带型稳定、大小精准的DNA Marker，如翌圣GoldBand系列DNA Marker（Cat#10501ES-10518ES）。
均匀加样
加样技巧
使用加样器时保持平稳，右手执移液枪，左手扶在移液枪前方细柄处，斜角45℃悬空插入点样孔中2-3 mm处点样。尽量避免戳破凝胶，避免样品接触凝胶表面，减少样品扩散。均匀的加样能够确保DNA片段在凝胶中的一致迁移，避免条带扭曲或模糊。
加样量
控制适当的加样量，过量的样品会导致条带模糊。适量的加样能够保证条带的清晰度和可读性，其上样量与核酸电泳制胶时的梳子大小相关。
梳子厚度（mm） | 梳子孔宽（mm） | 每孔最大上样量（μL） | 推荐上样量（μL） |
1.0 | ~3 | ~15 | 5-10 |
1.5 | ~4.2 | ~25 | 10-15 |
1.5 | ~7 | ~50 | 20-40 |
2.0 | ~1.5 | ~200 | 80-150 |
电泳条件
电压控制
根据凝胶长度和厚度调整电压，过高的电压会导致热量积累，影响DNA的迁移。适宜的电压设置有助于保持恒定的电泳速度，避免条带扭曲。
恒压电泳
优先选择恒压电泳而非恒流电泳，以保持电场强度的稳定。恒压电泳能够减少电泳过程中的热效应，提高分离效率。但需注意电压控制在110-130v为佳，过高电压易造成不稳定脉冲，影响电泳效果。
电压过高造成的条带模糊
预电泳
如果是新鲜配制的缓冲液，在加样前进行预电泳，可以清除凝胶中的杂质和气泡，平衡凝胶孔隙中的离子浓度，减少样品迁移过程中的阻力，提高电泳效率。预电泳时间一般建议5-10分钟。
使用新鲜凝胶
避免重复使用
重复使用的凝胶可能会因缓冲液的渗入而改变孔隙大小，影响分离效果。新鲜凝胶能够提供一致的孔隙率，保证电泳结果的可重复性。
核酸染料的选择
安全染料
使用YeaRed（Cat#10202ES）或YeaGreen（Cat#10204ES）无毒核酸染料，避免使用EB等有毒染料，减少紫外光暴露风险。安全染料不仅对操作人员更安全，而且对环境的影响更小。
小翌希望通过上述小窍门的实施，可以帮助大家显著提高核酸电泳的分离效率和结果的清晰度，进一步提高实验的效率和安全性~
产品推荐
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
YeaRed 核酸染料（10,000×水溶液） | 10202ES76 | 500 μL |
YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water) 核酸染料 | 10204ES76 | 500 μL |
Agarose琼脂糖 | 10208ES60/76 | 100 g/500 g |
GoldBand DL2,000 DNA Marker | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL600 DNA Marker | 10502ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL5,000 DNA Marker | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand DL10000 DNA Marker | 10505ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 100 bp DNA ladder | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 1 kb DNA ladder | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand Full-Scale DNA Ladder | 10511ES80 | 1 mL |
GoldBand 15000 DNA Marker | 10512ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 50bp DNA Ladder | 10515ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 100bp plus DNA Ladder | 10516ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 200 bp DNA Ladder | 10517ES60/80 | 100 T/10×100 T |
GoldBand 500 bp DNA Ladder | 10518ES60/80 | 100 T/10×100 T |