Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（瓶装） | 18461ES25 | 25 T | 425.00 |
18461ES60 | 100T | 1,395.00 |
产品描述
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用*的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。
该前处理试剂盒可与多种宿主细胞DNA残留（qPCR法）检测试剂盒配合使用，包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41301）、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41302）、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41303）和E.coli残留DNA检测试剂盒（Cat#41304）。
产品组分
类别 | 组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
18461ES25（25 T） | 18461ES60（100 T） | |||
Part I | 18461-A | 蛋白酶K（20 mg/mL） | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
Part Ⅱ | 18461-B | 磁珠悬浮液 | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
18461-C | 裂解液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
18461-D | 结合液 | 10 mL/瓶×1瓶 | 40 mL/瓶×1瓶 | |
18461-E | 洗涤液A* | 6 mL/瓶×1瓶 （需加9 mL乙醇） | 24 mL/瓶×1瓶 （需加36 mL乙醇） | |
18461-F | 洗涤液B* | 3 mL/瓶×1瓶 （需加12 mL乙醇） | 12 mL/瓶×1瓶 （需加48 mL乙醇） | |
18461-G | 洗脱液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
Part Ⅲ | 18461-H | 糖原 | 225 μL/支×1支 | 900 μL/支×1支 |
18461-I | Poly A钾盐 | 150 μL/支×1支 | 600 μL/支×1支 | |
运输和保存方法
Part I组分室温运输，4℃可保存1年，长期保存于-20℃。
Part II组分室温运输，室温保存，有效期1年。
Part Ⅲ 组分冰袋运输，-20℃保存1年。
注意事项
1. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。
2. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。
3. 处理样本及加样时，勤换枪头，避免交叉污染。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途！
实验前准备
1. 自备设备和试剂：磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪或其他全自动化提取仪，水浴锅或金属浴，离心机，漩涡振荡器，1.5 mL离心管，无水乙醇等。
2. 首使用前，在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。
一、手工提取操作方法
1. 样本处理
a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH=7.4）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，通常可考虑进行100倍稀释）。
b. 待测样本为干粉的，可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
c. 待测样本为复杂背景基质的，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液，10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec。
【注】：样本蛋白浓度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL，样本蛋白浓度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。
3. 60℃孵育20 min。
4. 孵育完成后，加入400 μL结合液、9 μL糖原、6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。
5. 加入20 μL磁珠，涡旋混匀后，放置10 min，每隔3 min涡旋混匀10 sec。
【注】：磁珠使用前需涡旋混匀，保证磁珠*重悬。在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后再行加样。
6. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠*吸附，小心吸出液体。
7. 加入500 μL洗涤液A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡或涡旋混匀，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。
8. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠*吸附，小心吸取液体。
9. 加入500 μL洗涤液B（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡或涡旋混匀，确保磁珠分散，离心管壁无聚集磁珠。
10.短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置1-2 min，待磁珠*吸附，小心吸取液体。
11.为保证尽量吸出残留液体，可将离心管快速离心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。
12.打开管盖，室温放置3 min直至乙醇*挥发。观察到磁珠表面无反光或出现裂隙即表明乙醇已挥发*。
13.将离心管从磁力架上取下，加入50-100 μL 65℃预热的洗脱液，振荡混匀，短暂离心后，65℃孵育5 min，期间可振荡混匀1次。
14.短暂离心后，将离心管放置于磁力架上静置2 min，待磁珠*吸附，小心将DNA溶液转移至新的离心管中，保存于-20℃，长期保存需放置于-80℃。
二、半自动化提取操作方法
配套自动化仪器使用，以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例（如要配套其他主流自动化仪器使用，程序可向翌圣生物科技（上海）股份有限公司获取）：
1. 样本处理
a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH=7.4）稀释100倍或1,000倍后提取。
b. 待测样本为干粉的，可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
c. 待测样本为复杂背景基质的，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液，10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec。
【注】：样本蛋白浓度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL，样本蛋白浓度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。
3. 60℃孵育20 min，即为预处理样本，待用。
4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂（以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例）：
板的名称 | 位置 | 试剂名称 | 用量/孔 |
样品处理板 | V1 | 预处理样本 | 200 µL |
结合液 | 400 µL | ||
糖原 | 9 µL | ||
Poly A钾盐 | 6 µL | ||
漂洗板 | V2 | 洗涤液A* | 500 µL |
洗涤板/磁珠板 | V3 | 磁珠悬浮液 | 20 µL |
洗涤液B* | 500 µL | ||
洗脱板 | V6 | 洗脱液 | 50-100 µL |
【注】：磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀，在一次性加样4-5次后，建议再次混匀后再行加样。
5. 按照提取仪的位置，正确安放上述96孔预装板，并放置96深孔磁棒套。
6. 运行如下程序，程序结束后，将洗脱液转移至新的离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
奥盛Auto-Pure32A的提取仪器的提取程序
步骤 | 孔位 | 混合时间(min) | 吸磁时间(sec) | 等待时间(min) | 容积(μL) | 混合速度(1-10) | 温度(℃) | 混合位置(0-100%) | 混合幅度(1-100%) | 吸磁位置(0-100%) | 吸磁速度(1-10) |
移磁珠 | 3 | 0.2 | 60 | 0 | 500 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
结合 | 1 | 15 | 90 | 0 | 600 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗1 | 2 | 1 | 60 | 0 | 500 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗2 | 3 | 1 | 60 | 4 | 500 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
洗脱 | 6 | 8 | 90 | 0 | 100 | 10 | 65 | 0 | 80 | 0 | 1 |
弃磁珠 | 3 | 0.2 | 0 | 0 | 500 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
HB220413
