FSQ-101东洋纺TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成试剂盒  

产品介绍：

适用于合成Realtime PCR用cDNA的逆转录试剂盒。

本试剂盒是适用于Realtime PCR用cDNA制作的逆转录反应试剂盒。由于采用了本公司
高性能逆转录酶『ReverTra Ace』，反应效率非常出色。另外，通过改良，使得带入到
Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到小，即使在PCR反应体系中添加
了多至20％体积的逆转录反应液，也能表现出良好的反应曲线，因此，适合用于表达量
较少的mRNA的高灵敏度测试。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作，仅需
约15分钟的逆转录反应，即可得到充分的cDNA。

特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰当比例的mix primer（oligo dT和Random primer）、以及经改良的反应缓冲液，可实现高效率的逆转录反应。

特征2. 反应时间仅需15分钟
逆转录反应仅需15分钟即可完成。此外，即便是要除去对Realtime PCR反应有阻碍的残留的模板RNA，也无须追加RNase H处理。
特征3. 提高了和Realtime PCR试剂的适应性
通过改良，使带入到Realtime PCR反应体系的逆转录反应液的影响降到小。即使在PCR反应体系中添加了多至20% (V/V)的逆转录反应液，也能表现出良好的反应曲线。因此，适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。

FSQ-101东洋纺TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成试剂盒 

规格参数Specifications

实验例1 与用其他公司产品cDNA合成量的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后，在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V)，用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见，在使用本试剂盒的情况下，两个目的片段都有high的收量。 

 实验例2 RNase H处理与否对检测灵敏度影响的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（蓝线）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒，按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理（红线）/未处理（橙线）两种方法进行)。然后，按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示，用B公司的试剂盒RNase H未处理（橙线）的情况下，检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（蓝线）进行反应，即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明，用本试剂盒的情况下，RNase H处理与否灵敏度相等。
※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。

实验例3 模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨

在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中，分别添加HeLa细胞由来的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分别进行逆转录反应。然后，采用和实验例2同样的方法扩增β-Actin基因。结果可见，在探讨的范围内，模板RNA的量和cDNA的收量密切相关，但无论模板RNA量的多寡，仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见，在目的片段浓度有差异的样品之间，逆转录反应效率的变化并不大，因此可将定量结果的误差控制在小范围内。

简要备注

Q1. 虽然反应时间仅需15分钟，但如果延长反应时间，是否可提高cDNA的合成量？
A1. 要对tRNA等高表达量的RNA进行*逆转录时，延长反应时间可提高合成量，但一般情况下按照标准的推荐条件37℃15分钟即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?  
 A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。
Q.3 需要进行RNase H处理吗?  
 A3. 由于残留的模板RNA会阻碍PCR反应，所以一般情况下逆转录反应结束后都要通过RNase H分解模板RNA。但本试剂盒运用本公司开发的新系统，在逆转录反应后可用非酶性方法除去模板RNA。因此，逆转录反应后无需RNase H处理。

 参考文献

1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226（2003）
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）

价格表

*反应体系为10μl时的反应次数。

TOYOBO原装PCR用cDNA合成试剂盒FSQ-101 TOYOBO原装PCR用cDNA合成试剂盒FSQ-101