DNA CpG甲基化检测

甲基化特异性的PCR（methylation-specific PCR）应用

    DNA甲基化在人的正常发育、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病（如发育畸形、癌症、心血管疾病、糖尿病和神经心理失调等）过程中发挥重要作用，已经成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。

    DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式，它不改变DNA的一级结构，却在细胞的发育、基因的表达、及基因组的稳定性中起着重要的作用。CpG岛的高甲基化是肿瘤中存在的普遍现象，而启动子CpG岛的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的第三种机制。

    因此，基因启动子甲基化检测在临床诊断（如甲基化检测与低剂量CT相结合）、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值。

甲基化特异性PCR法原理（Methylation-specific PCR,MSP） 

    MSP法的原理是基于DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是*存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是zui主要的甲基化位点，它在基因组中呈不均匀分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域，在哺乳动物中mC约占C总量的2－7％。一般说来，DNA的甲基化会抑制基因的表达；针对特定区域设计引物，再进行PCR扩增，甲基化的位点可以被当作一个C/T的SNP来处理；可利用直接测序法来判断是否CpG位点发生甲基化。具有方便快捷，灵敏度高的优点，是目前较为常用的甲基化检测方法。

 MSP实验流程：

1.基因组DNA制备，样本类型有：组织，血液，细胞，毛发，唾液等。

2.经亚硫酸氢钠处理后，未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。

3.DNA修饰后，进行纯化及回收。 

4.修饰后的DNA进行PCR扩增。

5.电泳或直接测序检测

6.实验报告（包括MSP基因组DNA，PCR产物及电泳照片）

样品要求
1、基因组DNA（≥1µg），纯度（OD：1.9-2.0）
2、若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料，请提供足够提取1µg以上基因组DNA的材料量。
3.样本运输途中，需要加冰袋，或干冰。