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慢病毒包装服务
慢病毒简介
慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组份和特性:比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂期细胞,更重要的,还能感染非分裂期的细胞。利用慢病毒载体,可以研究启动子的调控、过表达特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包装技术特点
病毒表达系统 | 腺病毒表达系统 | 慢病毒表达系统 |
病毒基因组 | 双链DNA病毒 | RNA逆转录病毒 |
自主复制 | 不能 | 不能 |
是否整合 | 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 | 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 |
感染细胞类型 | 感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。 | 感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。 |
表达丰度 | 高水平表达 | 中水平表达 |
表达时间 | 快(1-2 天) | 慢(2-4 天) |
滴度 | 滴度可达10E12pfu/mL | 滴度可达10E9-10E10TU/mL |
克隆容量 | 可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 | 可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
RNAi | 病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应,一般情况下不适合做RNAi实验 | 适合,是RNAi实验的优选工具 |
基因过表达 | 包装容量较大,可以满足较大基因的包装,是过表达基因的优选工具 | 包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响 |
过表达microRNA | 适合 | 适合,是过表达microRNA实验的优选工具 |
下调microRNA | 有报道但不成熟 | 有报道但不成熟 |
是否可以自行扩增 | 可以 | 需要特殊包装系统和包装环境 |
A. 慢病毒载体的构建:
根据不同的研究需求构建慢病毒载体,如用于RNAi的慢病毒载体、用于基因过表达的慢病毒载体、用于启动子活性研究的慢病毒载体等;
B. 慢病毒包装过程:
将重组病毒质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,在293T细胞中测定并标定病毒滴度。
C. 慢病毒包装结果:
滴定浓度:1×107~1×108TU/ml
zui终体积:1 ml纯化后的病毒液(储存于PBS)
储存:批量储存的*条件为-80°C。
慢病毒包装用途:
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于:
· 感染原代细胞;
· 制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;
· in vivo的基因操作;
· 转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。