腺病毒包装_腺病毒包装-上海基屹生物科技有限公司手机版

详细介绍

腺病毒（Adenovirus）是目前可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。其具备以下优点：

　　1. 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，除可感染几乎所有人的细胞类型外，还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。

　　2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。

　　3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性，因大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞，这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。

　　4. 病毒滴度高，可用于动物水平的实验。

　　5. 有较好的生物安全性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中；实验中虽然会有一定机率出现RCA（即复制型腺病毒），但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，所以一般危害不大。

技术要点

重组腺病毒的包装制备：重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位（pfu）中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。重组腺病毒可通过超速离心纯化，并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml，获得的量为2-4 ml。

重组腺病毒的特性：一般的，单个腺病毒通常是在30×150mm细胞培养皿中制备的。

获得量：1×10病毒颗粒/细胞

滴定浓度：1×1010～1×1012个病毒基因组/ml

zui终体积：1 ml纯化后的病毒液（储存于PBS）

储存：批量储存的*条件为-80°C

几种病毒载体的区别：

	腺病毒表达系统	慢病毒表达系统	逆转录病毒
病毒基因组成	双链DNA	单链RNA	单链RNA
载导容量	< 8 kb	< 8 kb	< 6kb
基因整合功能	无。病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因	有。病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因	有。
表达丰度	高水平表达	中	中
表达时间	快(1-2天)	慢（2-4天）	快（1-2天）
感染细胞类型	分裂和不分裂细胞	分裂和不分裂细胞。适用于难转染细胞	感染分裂细胞，但在干细胞中表达效率低
滴度TU/ml	10^12	10^9	10^9
四环素诱导系统	不可以	TET-ON , TET-OFF	不可以
毒性作用	细胞毒性	遗传毒性	遗传毒性
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性	低免疫原性
动物模型	不能得到转基因动物	可产生转基因动物，效率达50以上	可以，但很难
安全系数	高	高	中
能否用于MIRCORNA	可以	可以	不可以
RNAi	病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应，不适合做RNAi实验	适合，是RNAi实验的优选工具	可以用作RNAi实验
基因过表达	包装容量较大。可以满足较大基因的包装，是过表达基因的优选工具	包装容量有限，过表达的基因过大时，病毒滴度受到影响	包装容量有限，过表达的基因过大时，病毒滴度受到影响
常见应用	1、体外细胞基因转导2、基因治疗	1、体外细胞基因转导2、基因治疗	体外细胞基因转导，突变筛选，功能基因库构建

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